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重组胰蛋白酶试剂盒酶联免疫试剂盒
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价格：￥电议
更新日期：2026/7/21 11:33:26
生 产 地：中国大陆
产品型号：K02-RPT
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相关标签：酶联免疫,重组胰蛋白酶
详细内容
重组胰蛋白酶酶联免疫吸附测定试剂盒使用说明书
（96T）
（96T）
使用请仔细阅读说明书和提示部分。若有任何问题，请联系我们。
1.试剂盒用途
本试剂盒用于体外定量检测待测样品中重组胰蛋白酶含量。本试剂盒仅供研究和工业生产使用。
2.试剂盒基本参数
灵敏度：≤ 1 ng/ml
检测范围：0.078 - 40 ng/ml
特异性：可检测重组胰蛋白酶，与其它重组大肠菌表达系统相关蛋白无明显交叉反应。
重复性：板内，板间变异系数均 < 10%。
工作时间：熟练实验人员可在2.5小时内完成一次测定。
有效期：6个月
3.试剂盒组成及保存
未拆封的试剂盒可在2-8℃保存一周。如果一周以后才使用试剂盒，请拆开试剂盒按照下表中的条件分别保存各组分。
| 中文名称 | 规格 | 保存条件 |
| 冻干标准品 (A1) | 10ng/支×4支 | 2-8℃ |
| 浓缩标准品&样品稀释液& HRP-抗体稀释液（25 X） (P1) | 1瓶×5 mL | 2-8℃ |
| 浓缩洗涤液（25 X）(P2) | 1瓶×40 mL | 2-8℃ |
| 底物稀释液（TMB）(P3) | 1瓶×15 mL | 2-8℃避光 |
| 反应终止液 (P4) | 1瓶×5 mL | 2-8℃ |
| 抗体包被的ELISA酶标板（96孔，可拆卸） | 8孔×12条 | -20℃ |
| 浓缩辣根过氧化物酶化抗体 (A2) | 1支×0.05mL | -20℃ |
| 显色底物（TMB）(A3) | 5支×0.125 mL | -20℃避光 |
| 封板覆膜（可重复使用） | 5张 | / |
| 产品说明书 | 1份 | / |
| 质检报告 | 1份 | / |
说明:
①所有试剂瓶须旋紧瓶盖以防止蒸发和微生物污染。
②酶标板-20℃可存放6个月，2-8℃存放勿超过一周。
4.试验所需自备物品
① 酶标仪（滤光片组波长450 nm，参考波长650nm）
②高精度移液器，EP管及一次性吸头、一次性加样槽
③37℃恒温箱，双蒸水或去离子水
④洁净无纸屑的吸水纸或干布
5.待测样品注意事项
①样品收集后若在1周内进行检测的可保存于2-8℃，若不能及时检测，请按一次使用量分装，冻存于-20℃（1个月内检测），或 -80℃（3个月内检测），避免反复冻融。
②试剂盒检测范围不等同于样本的浓度范围，如果样品中检测物浓度高于标准品高值，请根据实际情况，做适当倍数稀释后再测。
③若使用化学裂解液制备的样本或细胞提取液，由于引入某些化学物质会导致ELISA测值出现偏差。
6.检测准备工作
①请提20分钟从冰箱中取出试剂盒平衡至室温，观察溶液是否有结晶，如果有结晶按提示进行操作。提15分钟打开酶标仪预热。
②稀释液配制
将浓缩标准品&样品稀释液&HRP-抗体稀释液用双蒸水稀释（1：25）。
③洗涤液配制
将浓缩洗涤液用双蒸水稀释（1：25）。
提示：从冰箱中取出的浓缩洗涤液可能有结晶，属于正常现象，可用40℃水浴加热使结晶完全溶解后再配制洗涤液（加热温度不要超过50℃，使用时洗涤液温度应为室温）。请当日使用。
④标准品配制
将标准品于1000转/分离心1分钟后，加入标准品&样品稀释液1.0 mL至冻干标准品中，旋紧管盖，静置10分钟后上下颠倒数次，待其充分溶解后，用移液器将其轻轻混匀（浓度为10 ng/mL）, 然后进行倍比稀释（注：不要直接在反应孔中进行倍比稀释）。建议配制成以下浓度：10、 5、 2.5、 1.25、 0.63、0.312、0.156、0 ng/mL。标准品&样品稀释液直接作为空白孔0 ng/mL。
提示：溶解和稀释标准品过程中尽量避免产生气泡。
倍比稀释方法
取7只EP管，每管加入500 μL标准品&样品稀释液，从10 ng/mL的标准品工作液中吸取500 μL加入含有500 μL标准品&样品稀释液的EP管中混匀配成5 ng/mL的标准品工作液，按此步骤往后依次吸取混匀。如下图。
标准品稀释图例（以500 μL为例）
提示：后一管直接作为空白孔，不再加入标准品工作液。
⑤HRP-抗体工作液配制
实验请先将抗体管1000转/分离心1分钟，以避免管壁及管盖上残留抗体。计算实验所需抗体用量（以100 μL /孔计算），实际配制时应多配制100-200 μL工作液。使用15分钟，用HRP-抗体稀释液将浓缩辣根过氧化物酶化抗体稀释为工作浓度（抗体：稀释液 = 1：250），当日使用。
⑥显色底物（TMB）工作液配制
计算实验所需显色底物用量（以100 μL /孔计算），实际配制时应多配制100-200 μL显色底物工作液。使用15分钟，用底物稀释液将TMB显色底物稀释为工作浓度（底物：稀释液 =1：20），避光保存，当日使用。
提示：配制显色底物（TMB）工作液要严格避免污染，如出现变蓝的现象应重新配制。
7.洗板方法
①自动洗板机：每孔加入洗涤液350-400 μL（根据加满孔的标准进行调整），注入和吸出间隔60。
②手工洗板：甩尽孔内液体，在洁净无纸屑的吸水纸或干布上拍干，每孔加入洗涤液350-400 μL（根据加满孔的标准进行调整），浸泡2-3分钟，甩尽孔内液体，在洁净无纸屑的吸水纸上拍干。
8.操作步骤
①将标准品工作液依次加入到两列孔中，每个浓度的工作液并列加两孔（复孔），每孔100 μL。待测样品加入到其他孔，每孔100 μL，若样本浓度高于检测范围，需用标准品&样本稀释液稀释后加样。将酶标板覆膜并置于37℃孵育60分钟。
提示：加样时将样品加于酶标板底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动酶标板混匀避免产生气泡。加样时间控制在10分钟内。
②洗涤：甩尽孔内液体，在洁净无纸屑的吸水纸或干布上拍干。每孔加入350-400 μL（根据加满孔的标准进行调整）洗涤液，浸泡2-3分钟，甩尽孔内液体，在洁净无纸屑的吸水纸或干布上拍干。重复此洗板步骤3次。
③每孔加入HRP-抗体工作液100 μL，轻轻晃动酶标板混匀避免产生气泡，将酶标板覆膜并置于37℃孵育30分钟。
④洗涤：用洗涤液洗板4次，方法同步骤2。
提示：酶标板洗涤不完全可能会造成标准曲线梯度差，或背景值高。应注意加入洗涤液的体积，以加满酶标板的孔为标准进行调整，确保所有的孔浸泡在洗涤液中并浸泡2-3分钟。
⑤显色：每孔加显色底物（TMB）工作液100 μL，酶标板覆膜置于37℃ 孵育10分钟。
提示: 加显色底物推荐使用排枪和加样槽，但应严格避免底物污染，确保所使用的加样槽洁净或一次性使用，加液时移液枪的枪头切不要接触孔内溶液以避免污染，影响实验结果。可通过观察加样槽中底物是否变蓝预判底物是否被污染。根据实际显色情况酌情缩短或延长，显色时间在5-30分钟范围内。当标准孔出现明显梯度时，即可终止。
⑥终止：每孔加终止液50 μL，终止反应，室温放置1分钟。推荐使用排枪和加样槽。
提示: 终止液的加入顺序应尽量与底物溶液的加入顺序相同。加液时移液枪的枪头切不要接触孔内溶液以避免污染，影响实验结果。
⑦读数：用酶标仪在450 nm波长（参考波长650nm）测量各孔的光密度（OD450/650 nm值）。
提示: 请提15分钟打开酶标仪电源，预热仪器，设置检测程序。
9.结果判断
①计算每组复孔的平均OD值。每个标准品的平均OD值减去空白孔的OD值作为矫正值。以标准品的浓度为横坐标（X），OD值为纵坐标（Y），绘出标准曲线（作图时亦可去掉空白组的值）。
②推荐使用业的曲线制作软件，如curve expert 1.3或ELISA Calc（请使用Logistic五参数拟合曲线计算方法绘制标准曲线）等。
③若样品OD值高于标准曲线上限，应适当稀释后重测。
④典型数据
由于实验操作条件的不同（如操作者、移液技术、洗板技术和稳定条件等），标准曲线的OD值会有所差异。以下数据和曲线仅供参考实验者需根据自己的实验建立标准曲线。
酶联免疫,重组胰蛋白酶
