罗氏诊断KAPA EvoPlus Kit助力实现样本打断自动化

通常，NGS建库使用的打断方法不外乎下面两种，各有优势又各有缺点。

• 一种是基于超声波的物理打断方法或称为机械打断。这种方法需要专门的设备和耗材，以Covaris的设备为代表。物理打断有其独特的优势，比如说样本断点的随机性高，不会有位点的偏好，也不会受样本纯度的影响。然而物理打断的设备和耗材成本很高，并且难以在工作站中整合超声设备实现自动化。通常情况下物理打断法处理一个样本需要平均3-5分钟的时间，因此一旦样本数量变多，它就变成一个操作单一同时又极度耗时的方法。

• 另一种是基于酶切打断的方法，包括转座子或各种混合水解酶等对DNA进行化学切断。酶切的方法不需要特殊的设备，只需要普通的PCR仪，可以批量的处理样本并轻松在工作站上实现自动化。同时酶切较物理打断的DNA损耗更小，文库转化效率更高，对于一些珍贵的样本，文库构建的更好。但是，目前的酶切试剂盒存在或多或少的数据偏好性。除此之外，酶切建库试剂盒构建的文库会有一定比例的假阳性嵌合，特别是做一些基因融合检测的应用时会干扰检测结果的判读。

  虽然这些假阳性干扰可以通过数据分析进行过滤，但这对生信人员提出了更高的要求且带来了更多的工作量。同时，酶切对于样本会有比较高的要求，比如样本的纯度(特别是EDTA的含量）和样本的降解程度，都会对酶切的效果产生诸多的影响。这使得实验室对于不同来源或不同类型的样本需要设置不同的SOP。对实验室技术人员和管理人员都造成了一定的困扰。

KAPA EvoPlus 主要解决了以下4个问题：