规格:5×106
运输方式:干冰或者活体细胞运输,保证细胞运输中的存活率。
特点:细胞代数为4-5代左右。
包装:内层无菌自封袋、专用防压泡沫盒、外层防压保温气泡袋、说明书。
细胞特性
1)来源:中国仓鼠
2)形态:成纤维细胞样
3)含量:>1x106 个/mL
4)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
5)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
运输和保存:可选择干冰运输及发送复苏存活细胞方式:(1)干冰运输,收到后立即转入液氮冻存或直接复苏;(2)存活细胞,收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。具体操作见细胞培养步骤。
细胞用途:仅供科研使用。
细胞培养步骤
一.培养基及培养冻存条件准备:
1)培养基信息:EX-CELL CD-CHO CHO Serum-free Medium,Chemically Defined(Sigma-Aldrich,货号:24361C)
添加物:
L-谷氨酰胺(Sigma-Aldrich,货号:G8540-25G)
Anti-Clumping Agent(Gibco,货号:01-0057AE)
备注:CD-CHO CHO Serum-free Medium请按照培养基配制说明书配制,L-谷氨酰胺配制浓度为200mM,工作浓度为8mM(即稀释25倍,如500ml CHO Serum-free Medium 中添加20ml 200mM L-谷氨酰胺,抗结团剂使用为1%,即500ml CHO Serum-free Medium 中添加5ml 抗结团剂)
2)培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。
3)冻存液:90%完全培养基,10%DMSO,现用现配。液氮储存。
二.细胞处理:
传代、转染、建库及实验室规模小试方法:
赛百慷(上海)生物技术股份有限公司提供的CHO-S细胞为已驯化的细胞,具有良好的适应悬浮生长及适应无血清培养基生长特性。
传代方法:
1.10cm皿中培养:使用计数器(计数器或者血球计数板计数)计数,接种密度为3×105个细胞/ml接种于提前37℃预热的新鲜培养基中(建议培养基取7-8ml,此时细胞生长状态较好),置于摇床上生长,转速为120-130rpm,湿度为70-80%,5%二氧化碳,温度为37℃。
2.培养约2-3天,细胞密度达到1×106个活细胞/ml时,应1000rpm,25℃离心5min,离心后计数(此时应稀释),然后接种密度为3×105个细胞/ml接种于提前37℃预热的新鲜培养基中。细胞数目足够时,可冻存。
也可选择125ml或者250ml摇瓶中培养细胞。(注意细胞培养液体积一般在总体积的五分之一,如在125ml摇瓶中加入25ml培养物,应注意在摇瓶中培养细胞时应将瓶盖稍微拧松,以便于气体交换,同时也不宜拧得过松,防止细胞污染)
转染方法:
在连续5代细胞密度未超过2×106个活细胞/ml时,可以使用FreeStyle Max转染试剂(Gibco,货号:16447)在CD CHO Serum-free Medium中直接转染。(注意:Anti-Clumping Agent会干扰FreeStyle Max转染试剂转染效率,同时也会干扰其他脂质体型转染试剂的转染效率)
建库方法:
若需要建库,可将细胞接种于125ml摇瓶中(接种密度为3×105个细胞/ml,总体积为25ml),此方法同样适用于稳定表达所需要蛋白的细胞株的建库工作。建库时,需要先建初级库(master bank)(一般为10支,每支细胞总数不少于4.5×107个细胞),此步骤结束后,从冻存的初级库中取出一支复苏,按照同样步骤建次级库(working bank)(相同的,一般为10支,每支细胞总数不少于4.5×107个细胞)。
实验室规模小试方法:
将挑选出的稳定细胞株从96孔板到24孔板到6孔板到10cm皿中逐级扩大培养后(此时需要注意在培养过程中应及时保种,以防止后续步骤出现污染,及应对可能的表达量衰退现象)以3×105个细胞/ml接种于125ml摇瓶中,转速为120-130rpm,温度为37℃,湿度为70-80%,连续培养一周,每天取样做出相应的细胞生长曲线,细胞活率曲线,蛋白表达曲线,可根据实际情况,每天取样测出培养基中葡萄糖含量,以便决定是否需要补加葡萄糖,同时可使用CHO Feed Bioreactor Supplement作为细胞发酵中补料,同时做出相应的细胞生长曲线,细胞活率曲线,蛋白表达曲线,为中试放大补料添加做出合理数据支持。
仓鼠卵巢细胞现货供应操作步骤:
1)贴壁细胞传代:提前将培养基、PBS放入37℃水浴锅内预热,用75%酒精擦拭后再放入超净台内,吸除或倒掉细胞瓶内旧培养液,加少量PBS润洗细胞,加入适量胰酶,使胰酶的量能盖住细胞,37℃孵育,每隔2~3min显微镜下观察,待贴壁细胞间间隙变大、细胞趋于圆形但还未漂起时弃去胰酶,加入新鲜培养基,晃动细胞瓶,终止胰酶作用,用吸管小心吹打贴壁的细胞,制成细胞悬液。控制吹打的力度,避免产生大量的气泡,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养,隔天观察贴壁生长情况。
2)悬浮细胞传代:将细胞悬液转移到无菌离心管内,1000rpm离心5min,弃去上清,加入新鲜的培养基,用吸管小心吹散沉淀,制成细胞悬液,将细胞悬液分别接种到另外的2~3个细胞瓶内,加入新鲜培养基,置37℃温箱培养。
1. 收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。
2. 所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。
1)公司努力实现为科学研究提供实验细胞技术服务。所提供的实验细胞及其子代,不能用于人体实验和临床诊断、治疗。
2)公司细胞资源中心承诺尽最大努力对实验细胞资源相关信息进行及时更新。但限于我们的技术条件,中心不保证其准确性。
3)从文献等处引用的信息本中心未进行核实,仅供参考。
4)使用者在接收、处理、保存、丢弃、转让及使用细胞的时候要遵守国内外有关的法律法规,充分考虑可能存在的风险和责任,采取适当的安全和处理措施尽量降低对健康或环境的危害。
Plant Vitamin K1,VK1 ELISA Kit 糖基转移酶GLT8D2抗体0.5mg
PLEKHM1糖原合酶激酶3α抗体0.5mg
PLEKHM2糖原合酶激酶-3β(多肽)0.5mg
PLEKHM3糖原合酶激酶-3β抗体0.5mg
Plexin A1糖原合酶激酶-3β抗体0.5mg
Plexin A2糖原合酶激酶-3β抗体0.5mg
Plexin A3糖原生成素相互作用蛋白抗体0.5mg
Plexin A4糖脂转移蛋白结构域2抗体0.5mg
Plexin B1特异性钾离子通道蛋白抗体0.5mg
Plexin B2特异性囊肿病液体蛋白150.5mg
Plexin B3特异性囊肿病液体蛋白150.5mg
Plg (Rabbit Plasminogen) ELISA Kit特异性囊肿病液体蛋白15抗体0.5mg
Plg(Human Plasminogen) ELISA Kit天冬氨酸蛋白酶ASP4抗体0.5mg
PLGA(Human plasminogen activator) ELISA Kit天冬氨酸蛋白酶家族蛋白(水稻蛋白的一种)(抗原)0.5mg
PLGF天冬氨酸蛋白酶家族蛋白抗体0.5mg
PLGF天冬氨酸-胱氨酸特异性蛋白酶家族(抗原)0.5mg
PLGF天冬氨酸-胱氨酸特异性蛋白酶家族抗体0.5mg
PLGF (Placenta growth factor fragment)(human)天冬氨酸-胱氨酸特异性蛋白酶家族抗体0.5mg
PLGF (Placenta growth factor)天冬氨酸受体抗体0.5mg
PLGF (Placenta growth factor)天门冬氨酸β羟化酶抗体0.5mg
PLGF ELISA Kit天门冬氨酸甲基转移酶PCMT抗体0.5mg
2,3-二氨基丙酸氢溴酸盐2,3-Dimethoxybenzaldehyde10377-51-2
2,3-二氨基丙酸盐酸盐2,3-Dichloro-5,6-dicyano-1,4-benzoquinone10377-52-3
2,3-二氮杂萘2,3-Dichlorobenzaldehyde103-80-0
2,3-二甲酚2,3-Dichlorobenzoic acid103-81-1
仓鼠卵巢细胞现货供应2,3-二甲基-2-环戊烯-1-酮Sodium 2,3-dihydroxynaphthalene-6-sulfonate103-82-2
2,3-二甲基丁烷 标准品2,3-Dimercapto-1-propanol103-83-3
2,3-二甲氧基苯甲醛2,4,5-Trifluoroaniline103-84-4
2,3-二甲氧基萘 97%2,4,5-Trifluorobenzoic acid10387-40-3
2,3-二氯苯甲醛2,4,5-Trifluorophenylacetic acid103-90-2
2,3-二氯苯甲酸Tris(dimethylaminomethyl)phenol104-01-8
2,3-二羟基苯甲醛2,4,6-Trichlorophenol10402-15-0
2,3-二羟基萘-6-磺酸钠2,4,6-Trichlorobenzoyl chloride104-04-1
2,3-二氢呋喃 99%2,4,6-TRINITROBENZENESULFONIC ACID1041-01-6
2,3-二巯基丙醇,95%2,4-DIMETHYLPHENOL PESTANAL10416-59-8
2,3-二巯基丁二酸 (-20℃)2-(tert-Butyl)-4,6-dimethylphenol10417-94-4
2,3-二溴吡啶2,4-Dimethyl aniline10421-85-9
2,3-二溴丙醇2,4-Dimethylbenzylamine104227-87-4
2,3-二溴丙烯2,4-Dichlorophenoxyacetic acid10424-65-4
2,3-环氧丙基-4-甲氧基苯基醚2,4-Dinitrophenol104376⁻⁷9-6
2,3-己二酮 ≥90%2,4-Dinitrofluorobenzene10442-39-4
2,3-戊二酮 97%2,5-Diphenyloxazole104-46-1
2,4,4-三甲基-1-戊烯;双异丁烯2,5-Difluoronitrobenzene104484⁻⁷1-1
2,4,4-三甲基-2-戊烯2,5-Dimethylaniline10450-59-6
2,4,5,6-四氯邻苯二甲腈2,5-Dimethylbromobenzene10450-60-9