Tricine-SDS-PAGE 配胶液1000mL

Tricine-SDS-PAGE 配胶液1000mL二：细胞裂解
5. 如果用本产品 A 型，用 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（1 mL 1×PBS 缓冲液+50 uL 溶液 A+ 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液）重悬细菌沉淀，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，一般选 1K-10K 频率处理 15 次，每次20 秒，间隔 1 分钟（必需放置在冰上）。裂解物不能粘稠，否则会堵塞
层析柱。
6. 如果用本产品 B 型，在 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（在 20 mL1×PBS 缓冲液中加入所有 30 mg 溶菌酶干粉，溶解后分装成 1 mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置）中加入 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液和 1 uL Benzonase，用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置 30 分钟，得到细菌裂解物。
7. 将超声或酶法细胞裂解物在 13000 g 4℃离心 10 分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性 GST 标记蛋白。
三：层析柱的制备和 GST 蛋白纯化
8. 摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 GST 蛋白产量决定，100 mL 菌液一般使用 200 uL 介质即可）。下列步骤各溶液的用量均针对 200 uL 介质而定，如果介质用量不同，各溶液用量需相应调整。
9. 用 5 mL 预冷的 1×PBS 缓冲液洗柱。
10.将第 7 步得到的上清液（含可溶性 GST 标记蛋白）上柱，让重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于 SDS-PAGE 电泳。GST 和谷胱甘肽之间的结合很缓慢，所以流速一定不能快，否则结合不充分。流速一般在 0.2-1 mL/分钟即可。如要提高 GST 标记蛋白与介质的结合效率，可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合 30 分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11.用 0.5-2 mL 1×PBS 缓冲液洗柱，收集并保存穿透液（含杂蛋白）。
12.用 0.2-1 mL GST 洗脱液洗柱，收集并保存穿透液（含 GST 标记蛋白）。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在 4℃放置，需立即用于后续处理（如浓度测定或 SDS-PAGE 电泳）或-80℃长期放置。
13.对收集的 2 种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或 SDS-PAGE 分析。注意：如果不预先脱盐，则只能用 Bradford 法或 OD 检测法（1 OD280 约等于 0.5 mg/mL 蛋白）测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于 GST 的分子量为 26 KD，所以在 SDS-PAGE 胶上，GST 标记蛋白将比天然蛋白大 26 KD。
原理及特点:
重组蛋白 N 端的 GST 谷胱甘肽 S 转移酶（Glutathione S Transferase）能提高重组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用 GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合，并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立，是目前分离纯化 GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的，具有下列
Tricine-SDS-PAGE 配胶液1000mL特点：
1. 一站式套装，含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达 GST 标记蛋白的细菌（酵母、杆状病毒、培养细胞）即可，非常方便。
2. 专一性强，一次过柱即可获得纯度高达 95%的 GST-标记蛋白。
3. 只能在非变性条件下使用，只可用于纯化没形成包涵体的 GST 标记蛋白。
4. 每次可以处理 20 mL 的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5. 提供 4 mL 浓度为 50%的谷胱甘肽-Agarose 介质，可吸附 5-10 mgGST 标记蛋白质。
6. 本介质可以反复使用多次。
一:重组蛋白的表达和细菌收集
1. 37℃振荡培养 20 mL 含表达质粒的细菌到 OD600=0.6-0.8。
2. 加 IPTG 到终浓度为 0.1 mM，30℃振荡培养 3 小时或 22℃振荡培养 8小时（或过夜）。
3. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清。
4. 用 1×PBS 缓冲液重悬细菌沉淀，4℃ 5000 g 离心 10 分钟，弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。

大鼠8异前列腺素(8-iso-PG)elisa试剂盒Rat 8-iso prostaglandin,8-iso-PG ELISA Kit96T/48T

大鼠γ干扰素诱导蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA试剂盒Rat interferon-inducible protein 16,IFI16/p16 ELISA Kit96T/48T

大鼠基质细胞衍生因子1a(SDF-1a/CXCL12)ELISA试剂盒 Rat Stromal cell derived factor 1a,SDF-1a ELISA Kit96T/48T

大鼠血浆α颗粒膜蛋白(GMP-140)ELISA试剂盒 Rat alpha-granular membrane protein,GMP-140 ELISA Kit96T/48T

大鼠髓过氧化物酶(MPO)ELISA试剂盒Rat myeloperoxidase,MPO ELISA Kit96T/48T

大鼠颗粒酶B(Gzms-B)ELISA试剂盒Rat granzymes B,Gzms-B ELISA Kit96T/48T

大鼠颗粒酶A(Gzms-A)ELISA试剂盒Rat granzymes A,Gzms-A ELISA Kit96T/48T

大鼠淋巴细胞趋化因子(Lptn/LTN/XCL1)ELISA试剂盒Rat lymphotactin,Lptn/LTN ELISA Kit96T/48T

大鼠末端补体复合物C5b-9(TCC C5b-9)ELISA试剂盒Rat terminal complement complex C5b-9,TCC C5b-9 ELISA Kit96T/48T

大鼠补体蛋白4(C4)ELISA试剂盒Rat Complement 4,C4 ELISA Kit96T/48T

大鼠肾素(Renin)ELISA试剂盒 Rat Renin ELISA Kit96T/48T

大鼠膜联蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)ELISA试剂盒Rat annexin Ⅴ,ANX-Ⅴ ELISA Kit96T/48T

大鼠抗内皮细胞抗体(AECA)ELISA试剂盒Rat anti-endothelial cell antibody,AECA ELISA Kit96T/48T

大鼠全段甲状旁腺素(i-PTH)ELISA试剂盒Rat intact Parathormone ,i-PTH ELISA Kit 96T/48T

大鼠牛小肠碱性磷酸酶(CIAP)ELISA试剂盒Rat Calf Intestine Alkaline Phosphatase,CIAP ELISA Kit96T/48T

大鼠肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)ELISA试剂盒associated protein A,SP-A ELISA Kit96T/48T

大鼠克拉拉细胞蛋白(CC16) ELISA试剂盒 Rat Clara cell protein,CC16 ELISA Kit 96T/48T

大鼠肾上腺素(EPI)ELISA试剂盒Rat Epinephrine/Adrenaline,EPI ELISA Kit96T/48T

Tricine-SDS-PAGE 配胶液1000mL大鼠髓过氧化物酶特异性抗中性粒细胞胞质抗体IgG(MPO-ANCA IgG)ELISA试剂盒Rat myeloperoxidase-antineutrophil cytoplasmic antibody IgG,MPO-ANCA IgG ELISA Kit96T/48T

大鼠补体蛋白3(C3)ELISA试剂盒Rat Complement 3,C3 ELISA Kit96T/48T

大鼠叠氮胸苷(AZT)ELISA试剂盒Rat Azidothymidine,AZT ELISA Kit96T/48T

大鼠多巴胺(DA)ELISA试剂盒Rat dopamine,DA ELISA Kit96T/48T

大鼠高灵敏度促甲状腺激素(U-TSH)ELISA试剂盒Rat ultrasensitive thyroid-stimulating hormone,U-TSH ELISA Kit96T/48T

大鼠高敏甲状腺素(u-T4)ELISA试剂盒Rat Ultrasensitivity Thyroxine,u-T4 ELISA Kit96T/48T

大鼠谷氨酸脱羧酶自身抗体(GAD-Ab)ELISA试剂盒Rat glutamic acid decarboxylase autoantibody,GAD-Ab ELISA Kit96T/48T

大鼠甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP) ELISA试剂盒 Rat Parathyroid Hormone Related Protein,PTHrP ELISA Kit96T/48T

大鼠抗心磷脂抗体IgG(ACA-IgG)ELISA试剂盒Rat anti-cardiolipin antibody IgG,ACA-IgG ELISA Kit96T/48T

大鼠抗心磷脂抗体IgM(ACA-IgM)ELISA试剂盒rat anti-cardiolipin antibody IgM,ACA-IgM ELISA Kit96T/48T

大鼠抗心磷脂抗体IgA(ACA-IgA)ELISA试剂盒Rat anti-cardiolipin antibody IgA,ACA-IgA ELISA Kit96T/48T

大鼠apelin 12(AP12)ELISA试剂盒Rat apelin 12,AP12 ELISA Kit96T/48T

大鼠α干扰素(IFN-α)ELISA试剂盒Rat Interferon α,IFN-α ELISA Kit96T/48T

大鼠的牛血清白蛋白残留检测ELISA试剂盒Rat rudimental bovine serum albumin check-up ELISA Kit96T/48T

大鼠凝血因子Ⅱ(FⅡ)ELISA试剂盒Rat coagulation factor Ⅱ,FⅡ ELISA Kit96T/48T

大鼠内毒素(ET)ELISA试剂盒Rat endotoxin,ET ELISA Kit96T/48T

大鼠过氧化物酶体增殖因子活化受体γ( PPAR-γ)ELISA试剂盒Rat Peroxisome Proliferator-activated receptor γ,PPAR-γ ELISA Kit96T/48T

大鼠环孢素A(CsA)ELISA试剂盒Rat Cyclosporine A,CsA ELISA Kit96T/48T

大鼠超敏C反应蛋白(hs-CRP)ELISA试剂盒Rat high sensitivity C-Reactive Protein,hs-CRP ELISA Kit96T/48T

大鼠β2糖蛋白1抗体IgA/G/M(β2-GP1 IgA/G/M)ELISA试剂盒Rat β2-glycoprotein 1 antibody IgA/G/M,β2-GP1 IgA/G/M ELISA Kit96T/48T

大鼠抗子宫内膜抗体(EMAb)ELISA试剂盒Rat Endometrium Antibody,EMAb ELISA Kit96T/48T

大鼠低密度脂蛋白免疫复合物(LDL-IC)ELISA试剂盒Rat LDL-IC ELISA Kit96T/48T

大鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)ELISA试剂盒Rat 15-lipoxygenase,15-LO/LOX ELISA Kit96T/48T

大鼠肌钙蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)ELISA试剂盒Rat Troponin Ⅰ,Tn-Ⅰ ELISA Kit96T/48T

大鼠血清淀粉样蛋白A(SAA)ELISA试剂盒Rat Serum amyloid A,SAA ELISA Kit96T/48T

大鼠结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)ELISA试剂盒Rat Haptoglobin,Hpt/HP ELISA Kit96T/48T

大鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA试剂盒Rat α1-Acid glycoprotein,α1-AGP ELISA Kit96T/48T

大鼠内皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)ELISA试剂盒Rat Endothelial nitric oxide synthase 3,eNOS-3 ELISA Kit96T/48T

大鼠胆固醇酯转移蛋白(CETP)ELISA试剂盒Rat cholest erolester transfer protein,CETP ELISA Kit96T/48T

大鼠血管紧张素原(aGT)ELISA试剂盒Rat cholest erolester transfer protein,CETP ELISA Kit96T/48T

大鼠热休克蛋白60(Hsp-60)ELISA试剂盒Rat heat shock protein 60,hSP-60 ELISA Kit96T/48T

大鼠丙二醛(MDA)ELISA试剂盒Rat malondialchehyche,MDA ELISA Kit96T/48T

大鼠超氧化物歧化酶(SOD)ELISA试剂盒Rat Super Oxidase Dimutase,SOD ELISA Kit96T/48T

大鼠热休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)ELISA试剂盒Rat Heat Shock Protein glycoprotein 96,HSP gp96 ELISA Kit 96T/48T

大鼠血清总补体(CH50)ELISA试剂盒Rat 50% complement hemolysis,CH50 ELISA Kit96T/48T

大鼠可溶性CD86(B7-2/sCD86)ELISA试剂盒Rat soluble Cluster of differentiation 86,sCD86 ELISA Kit96T/48T

大鼠低氧诱导因子1α(HIF-1α)ELISA试剂盒Rat hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α ELISA Kit96T/48T

大鼠胰淀素(Amylin)ELISA试剂盒Rat Amylin ELISA Kit96T/48T

大鼠白三烯C4(LTC4)ELISA试剂盒Rat Leukotriene C4,LT-C4 ELISA Kit96T/48T

大鼠细胞色素C(Cyt-C)ELISA试剂盒Rat Cytochrome-C,Cyt-C ELISA Kit96T/48T

大鼠血管紧张素Ⅰ(Ang-Ⅰ)ELISA试剂盒Rat angiotension Ⅰ,Ang-Ⅰ ELISA Kit96T/48T

大鼠黑色素细胞抗体(MC Ab)ELISA试剂盒Rat melanocyte antibody,MC Ab ELISA Kit96T/48T