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EGTA 溶液 ,0.5mg/mL, 蛋白级10mL
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价格：￥电议
更新日期：2026/8/7 17:04:43
生 产 地：中国大陆
产品型号：
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详细内容
EGTA 溶液 ,0.5mg/mL, 蛋白级10mL原理及特点:
重组蛋白 N 端的 GST 谷胱甘肽 S 转移酶（Glutathione S Transferase）能提高重组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用 GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合，并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立，是目前分离纯化 GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的，具有下列
特点：
1. 一站式套装，含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达 GST 标记蛋白的细菌（酵母、杆状病毒、培养细胞）即可，非常方便。
2. 专一性强，一次过柱即可获得纯度高达 95%的 GST-标记蛋白。
3. 只能在非变性条件下使用，只可用于纯化没形成包涵体的 GST 标记蛋白。
4. 每次可以处理 20 mL 的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5. 提供 4 mL 浓度为 50%的谷胱甘肽-Agarose 介质，可吸附 5-10 mgGST 标记蛋白质。
6. 本介质可以反复使用多次。
EGTA 溶液 ,0.5mg/mL, 蛋白级10mL一:重组蛋白的表达和细菌收集
1. 37℃振荡培养 20 mL 含表达质粒的细菌到 OD600=0.6-0.8。
2. 加 IPTG 到终浓度为 0.1 mM，30℃振荡培养 3 小时或 22℃振荡培养 8小时（或过夜）。
3. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清。
4. 用 1×PBS 缓冲液重悬细菌沉淀，4℃ 5000 g 离心 10 分钟，弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。
二：细胞裂解
5. 如果用本产品 A 型，用 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（1 mL 1×PBS 缓冲液+50 uL 溶液 A+ 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液）重悬细菌沉淀，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，一般选 1K-10K 频率处理 15 次，每次20 秒，间隔 1 分钟（必需放置在冰上）。裂解物不能粘稠，否则会堵塞
层析柱。
6. 如果用本产品 B 型，在 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（在 20 mL1×PBS 缓冲液中加入所有 30 mg 溶菌酶干粉，溶解后分装成 1 mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置）中加入 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液和 1 uL Benzonase，用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置 30 分钟，得到细菌裂解物。
7. 将超声或酶法细胞裂解物在 13000 g 4℃离心 10 分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性 GST 标记蛋白。
EGTA 溶液 ,0.5mg/mL, 蛋白级10mL三：层析柱的制备和 GST 蛋白纯化
8. 摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 GST 蛋白产量决定，100 mL 菌液一般使用 200 uL 介质即可）。下列步骤各溶液的用量均针对 200 uL 介质而定，如果介质用量不同，各溶液用量需相应调整。
9. 用 5 mL 预冷的 1×PBS 缓冲液洗柱。
10.将第 7 步得到的上清液（含可溶性 GST 标记蛋白）上柱，让重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于 SDS-PAGE 电泳。GST 和谷胱甘肽之间的结合很缓慢，所以流速一定不能快，否则结合不充分。流速一般在 0.2-1 mL/分钟即可。如要提高 GST 标记蛋白与介质的结合效率，可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合 30 分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11.用 0.5-2 mL 1×PBS 缓冲液洗柱，收集并保存穿透液（含杂蛋白）。
12.用 0.2-1 mL GST 洗脱液洗柱，收集并保存穿透液（含 GST 标记蛋白）。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在 4℃放置，需立即用于后续处理（如浓度测定或 SDS-PAGE 电泳）或-80℃长期放置。
13.对收集的 2 种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或 SDS-PAGE 分析。注意：如果不预先脱盐，则只能用 Bradford 法或 OD 检测法（1 OD280 约等于 0.5 mg/mL 蛋白）测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于 GST 的分子量为 26 KD，所以在 SDS-PAGE 胶上，GST 标记蛋白将比天然蛋白大 26 KD。
7221-prfPADM-prf前脂肪细胞分化培养基500 ml
7311-prfOEpiCM-prf卵巢上皮细胞培养基500 ml
7521-prfMSCM-acf-prf间充质干细胞培养基500 ml
7531-prfMODM-prf间充质干细胞成骨细胞分化培养基500 ml
7541-prfMADM-prf间充质干细胞脂肪细胞分化培养基500 ml
7551-prfMCDM-prf间充质干细胞软骨细胞分化培养基500 ml
7611-prfMEpiCM-prf乳腺上皮细胞培养基500 ml
12201BYP 琼脂培养基基础250g/瓶用于巴斯德氏菌的选择性分离培养，需添加消化血液
12202布氏菌疫苗培养基（液体）1 万 ml/袋用于布氏菌疫苗生产
12203布氏活菌苗培养基（含琼脂）250g/瓶用于布氏活菌苗和布氏菌的传代
12204鸡副嗜血杆菌疫苗培养基1 万 ml/袋用于制备鸡鼻炎菌苗
12205链球菌疫苗培养基1 万 ml/袋培养链球菌，用于猪及羊链球菌灭活菌苗生产和检验
12206猪丹毒疫苗培养基1 万 ml/袋用于制造猪丹毒灭活菌苗、活菌苗
12207猪肺疫疫苗培养基1 万 ml/袋用于猪肺疫疫苗制备
12208马丁肉汤250g/瓶用于多杀性巴杆菌、猪丹毒菌、猪肺疫、链球菌菌苗制造及检验
12210马丁琼脂250g/瓶用于多杀性巴杆菌、猪丹毒菌、猪肺疫、链球菌菌苗制造及检验
12211仔猪副伤寒疫苗培养基1 万 ml/袋用于仔猪副伤寒菌疫苗的制造
12212改良 Minca 培养基基础250g/瓶用于大肠埃希氏菌 K88、K99、987P 菌株，每升培养基中需添加5ml 甘油
12213鸡毒支原体疫苗培养基1 万 ml/袋
22201无菌辅酶Ⅰ（NAD）溶液25mg×10 支/盒
EGTA 溶液 ,0.5mg/mL, 蛋白级10mL22202无菌青霉素溶液80 万单位×10 支/盒
11901MS 培养基250g/瓶含琼脂，广泛用于植物的器官、花 药、细胞和原生质体的培养
119021Kg/袋
11903MS 培养基（1/2 蔗糖）250g/瓶蔗糖 15g/L，用于植物组织培养
119041Kg/袋
11905MS 培养基（1/2 蔗糖、不含琼脂）250g/瓶蔗糖 15g/L，不含琼脂，用于植物 组织培养
119061Kg/袋
119441/2MS 培养基250g/瓶大量元素减半，其余成分不变，用 于植物组织培养
119451KG/袋
11946MS 大量元素100L/瓶用于制备 MS 培养基
11947MS 微量元素500L/瓶用于制备 MS 培养基
11948MS 维生素500L/瓶用于制备 MS 培养基
11949MS 培养基（不含琼脂和蔗糖）100L/瓶用于植物组织培养
11953MS 培养基（仅含大量元素与微量元素）100L/瓶用于植物组织培养
11907Kassanis 培养基250g/瓶用于植物组织培养
119081Kg/袋
11909N6 培养基250g/瓶含蔗糖，不含琼脂。用于植物组织培养，适合于大多数单子叶植物， 尤其是禾本科植物小麦、水稻等
119101Kg/袋
11952N6 培养基（不含蔗糖和琼脂）100L/瓶用于植物组织培养
11956B5 培养基1Kg/袋含蔗糖（20g/L）和琼脂
11913White 培养基250g/瓶用于植物组织培养，适合于根的培 养
119141Kg/袋
11915NB 培养基250g/瓶用于植物组织培养
119161Kg/袋
11917NS 培养基250g/瓶用于植物组织培养
119181Kg/袋
11919RNS 培养基250g/瓶用于植物组织培养
119201Kg/袋
11921LS 培养基250g/瓶用于植物组织培养
119221Kg/袋
11923HB 培养基250g/瓶用于植物组织培养
119241Kg/袋
11925H 培养基250g/瓶用于植物组织培养
119261Kg/袋
11927Miller 培养基250g/瓶用于植物组织培养
119281Kg/袋
11929MT 培养基250g/瓶用于植物组织培养
119301Kg/袋
11931Nielsen 培养基250g/瓶用于植物组织培养
119321Kg/袋
11933Nitsch&Nitsch 培养基250g/瓶用于植物组织培养
119341Kg/袋
11935木本植物用培养基（WPM）250g/瓶用于植物组织培养
119361Kg/袋
11937KC 培养基250g/瓶用于兰花各属无菌种子发芽和组 织培养
119381Kg/袋
11939NLN 基本培养基（Lichter，1982）250g/瓶用于植物组织培养
