胰凝乳蛋白酶抑制剂溶液，20mg/mL1mL

胰凝乳蛋白酶抑制剂溶液，20mg/mL1mL原理及特点:
重组蛋白 N 端的 GST 谷胱甘肽 S 转移酶（Glutathione S Transferase）能提高重组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用 GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合，并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立，是目前分离纯化 GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的，具有下列
特点：
1. 一站式套装，含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达 GST 标记蛋白的细菌（酵母、杆状病毒、培养细胞）即可，非常方便。
2. 专一性强，一次过柱即可获得纯度高达 95%的 GST-标记蛋白。
3. 只能在非变性条件下使用，只可用于纯化没形成包涵体的 GST 标记蛋白。
4. 每次可以处理 20 mL 的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5. 提供 4 mL 浓度为 50%的谷胱甘肽-Agarose 介质，可吸附 5-10 mgGST 标记蛋白质。
6. 本介质可以反复使用多次。
一:重组蛋白的表达和细菌收集
1. 37℃振荡培养 20 mL 含表达质粒的细菌到 OD600=0.6-0.8。
2. 加 IPTG 到终浓度为 0.1 mM，30℃振荡培养 3 小时或 22℃振荡培养 8小时（或过夜）。
3. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清。
4. 用 1×PBS 缓冲液重悬细菌沉淀，4℃ 5000 g 离心 10 分钟，弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。
胰凝乳蛋白酶抑制剂溶液，20mg/mL1mL二：细胞裂解
5. 如果用本产品 A 型，用 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（1 mL 1×PBS 缓冲液+50 uL 溶液 A+ 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液）重悬细菌沉淀，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，一般选 1K-10K 频率处理 15 次，每次20 秒，间隔 1 分钟（必需放置在冰上）。裂解物不能粘稠，否则会堵塞
层析柱。
6. 如果用本产品 B 型，在 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（在 20 mL1×PBS 缓冲液中加入所有 30 mg 溶菌酶干粉，溶解后分装成 1 mL/管，取胰凝乳蛋白酶抑制剂溶液，20mg/mL1mL一管使用，剩余的-20℃放置）中加入 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液和 1 uL Benzonase，用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置 30 分钟，得到细菌裂解物。

7. 将超声或酶法细胞裂解物在 13000 g 4℃离心 10 分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性 GST 标记蛋白。
三：层析柱的制备和 GST 蛋白纯化
8. 摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 GST 蛋白产量决定，100 mL 菌液一般使用 200 uL 介质即可）。下列步骤各溶液的用量均针对 200 uL 介质而定，如果介质用量不同，各溶液用量需相应调整。
9. 用 5 mL 预冷的 1×PBS 缓冲液洗柱。
10.将第 7 步得到的上清液（含可溶性 GST 标记蛋白）上柱，让重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于 SDS-PAGE 电泳。GST 和谷胱甘肽之间的结合很缓慢，所以流速一定不能快，否则结合不充分。流速一般在 0.2-1 mL/分钟即可。如要提高 GST 标记蛋白与介质的结合效率，可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合 30 分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11.用 0.5-2 mL 1×PBS 缓冲液洗柱，收集并保存穿透液（含杂蛋白）。
12.用 0.2-1 mL GST 洗脱液洗柱，收集并保存穿透液（含 GST 标记蛋白）。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在 4℃放置，需立即用于后续处理（如浓度测定或 SDS-PAGE 电泳）或-80℃长期放置。
13.对收集的 2 种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或 SDS-PAGE 分析。注意：如果不预先脱盐，则只能用 Bradford 法或 OD 检测法（1 OD280 约等于 0.5 mg/mL 蛋白）测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于 GST 的分子量为 26 KD，所以在 SDS-PAGE 胶上，GST 标记蛋白将比天然蛋白大 26 KD。

10401GN 增菌液250g/瓶用于志贺氏菌增菌

10402SS 琼脂250g/瓶用于肠道菌选择性分离

10405葡萄糖铵琼脂培养基250g/瓶用于志贺氏菌生化试验

10407志贺氏菌增菌肉汤基础250g/瓶用 于 志 贺 氏 菌 的 选 择 性 增 菌（ISO），每 100ml 添加 0.05mg新生霉素

10357RV R10 肉汤250g/瓶用于沙门氏菌的分离培养

10358Muller -Kauffmann 四硫磺酸钠肉汤基础250g/瓶用于沙门氏菌增菌，每 100ml 培 养基中添加 1 支 20315 和 1 支20316

11702金氏 B 培养基250g/瓶用 于 绿 脓 杆 菌 产 荧 光 鉴 定 ， 每100ml 培养基中添加 1 支 21702

11703乙酰胺肉汤250g/瓶用于铜绿假单胞菌产氨试验

11705十六烷基三甲基溴化铵培养基250g/瓶用于绿脓杆菌分离培养

11706乙酰胺培养基250g/瓶用于绿脓杆菌分离培养

11707绿脓菌素测定培养基250g/瓶用于绿脓菌素测定，每 100ml 培养 基中添加 1 支 21702

11710溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基250g/瓶用于铜绿假单胞菌的选择性分离

11713假单胞菌 CFC 选择性培养基250g/瓶用 于 假 单 胞 菌 选 择 性 分 离 ， 每100ml 培养基中添加 1 支 21702 和21704

11717假单胞菌琼脂培养基250g/瓶用于铜绿假单胞菌绿脓菌素测定， 每 100ml 培养基中添加 1 支 21702

胰凝乳蛋白酶抑制剂溶液，20mg/mL1mL11726假单胞菌分离琼脂250g/瓶用于假单胞菌的检验

11728NAC 琼脂培养基250g/瓶用于铜绿假单胞菌的分离培养

11730洋葱假单胞菌琼脂基础（PC）250g/瓶用于洋葱假单胞菌的分离，每升培 养基中添加过滤除菌的 羟基噻吩 青霉溶液素（100mg）和多粘菌素 B 溶液（300,000units）

11401含 0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆肉汤（TSB-YE）250g/瓶用于李斯特氏菌的培养

11402含 0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆琼脂（TSA-YE）250g/瓶用于李斯特氏菌纯化

11403李氏增菌肉汤（LB1，LB2）基础250g/瓶用于李斯特氏菌增菌，每 225ml 培养 基中添加 1 支 21401 和 1 支 21402 组成 LB1，每 200ml 培养基中添加 1 支 21416 和 1 支 21417 组成 LB2

11404PALCAM 琼脂基础250g/瓶用 于 李 斯 特 氏 菌 选 择 性 分 离 ， 每100ml 培养基中添加 1 支 21403

11407Fraser 肉汤增菌液基础 250g/瓶用于李斯特氏菌增菌，每 225ml 培养基中添加 21407、21408、21418 各 1 支组成 Half-Fraser，每 100ml 添加 1 套支 21419、21420 组成 Fraser

11408牛津琼脂（OXA）基础250g/瓶用 于 李 斯 特 氏 菌 选 择 性 分 离 ， 每100ml 培养基中添加 1 支 21409

11411EB 肉汤增菌液基础250g/瓶用于李斯特氏菌的选择性增菌，每225ml 培养基中添加 1 支 21410

11412改良 UVM 增菌液基础250g/瓶用于李斯特氏菌的选择性增菌，每225ml 培养基中添加 21422、21413各 1 支

11413LPM 琼脂基础250g/瓶用 于 李 斯 特 氏 菌 选 择 性 分 离 ， 每100ml 培养基中添加 1 支 21414

11414LPM 琼脂基础（含七叶苷与柠檬酸铁铵）250g/瓶用 于 李 斯 特 氏 菌 选 择 性 分 离 ， 每100ml 培养基中添加 1 支 21414

11415缓冲李斯特氏菌增菌肉汤基础250g/瓶用于李斯特氏菌的选择性增菌，每225ml 培养基中添加 1 支 21415

11416改良 McBride 琼脂基础（MMA）250g/瓶用于李斯特氏菌的选择性分离，每升 培养基中需添加 2.5g 苯乙醇及 200mg 环乙酰亚胺或 30mg 复达欣

21423改良牛津培养基10 支/盒每支用于 100ml11417 中

108017.5%氯化钠肉汤250g/瓶用于球菌的均质增菌

10904脑-心浸萃液态培养基250g/瓶用于粪链球菌验证，也可用于苛养 菌的培养

10905脑-心浸萃琼脂培养基250g/瓶用于粪链球菌验证，也可用于苛养 菌的培养

10906胆汁液态培养基250g/瓶用于粪链球菌验证和培养

10907叠氮化钠葡萄糖肉汤250g/瓶用于粪链球菌增菌

10908Pfizer 肠球菌选择性琼脂（PSE 琼脂）250g/瓶用于粪链球菌选择性分离

10909胆汁七叶苷琼脂250g/瓶用于肠球菌确证和培养

10910肠球菌琼脂（胆汁七叶苷叠氮钠琼脂）250g/瓶用于肠球菌选择性分离培养和计 数

10911肠球菌肉汤250g/瓶用于肠球菌选择性菌

10912牛心汤培养基250g/瓶用于链球菌增菌

10913选择性牛心汤增菌培养基250g/瓶用于链球菌选择性增菌

10914牛心汤琼脂250g/瓶用于绵羊血琼脂平板制备

10915Todd-Hewitt 肉汤250g/瓶用于 β-溶血素制备

10916CATC 琼脂250g/瓶含 TTC，用于肠球菌的分离和培养

10917葡萄糖肉汤250g/瓶用于溶血性链球菌增菌

10918乙基紫叠氮钠肉汤EVA 250g/瓶用于链球菌的增菌培养

109196.5%氯化钠葡萄糖琼脂250g/瓶用于肠球菌确证和培养

10922轻唾琼脂培养基250g/瓶用于轻唾链球菌的分离培养，每1L 培养基中添加 1ml20805 或每100ml 培养基中添加 2 支 20518

10923叠氮钠血琼脂基础250g/瓶添加 5%脱纤维羊血，用于链球菌 和葡萄球菌分离和溶血试验

10924Slanetz ａnd Bartley 培养基250g/瓶用于肠球菌、粪链球菌的分离和培 养

117141%氯化钠碱性蛋白胨水APW250g/瓶用于嗜水气单胞菌增菌

11718氨苄青霉素麦康凯琼脂基础AMA 250g/瓶用于嗜水气单胞菌的分离培养，每100ml 培养基中添加 1 支 21707

11719RS 琼脂250g/瓶用于致病性嗜水气单胞菌的分离

11720普通肉汤250g/瓶含 0.1%磷酸二氢钾，用于致病性嗜水气单胞菌的增菌，也可用于其它 细菌的增菌

11721普通琼脂250g/瓶含 0.1%磷酸二氢钾，用于致病性嗜水气单胞菌的纯化，也可用于其它 细菌的培养

11722碱性蛋白胨水250g/瓶用于致病性嗜水气单胞菌的培养

11723AHM 鉴别培养基250g/瓶用于致病性嗜水气单胞菌的鉴别

11724脱脂奶蔗糖蛋白胨培养基250g/瓶用于致病性嗜水气单胞菌的鉴别

11725蔗糖胰蛋白胨肉汤白糖250g/瓶用于致病性嗜水气单胞菌的斑点 酶联免疫试验

11727气单胞菌鉴别琼脂ADA 250g/瓶用于气单胞菌的分离和鉴别

11102孟加拉红培养基250g/瓶用于霉菌和酵母菌计数

11103察氏培养基250g/瓶用于青霉和曲霉的分离鉴别

11104马铃薯-葡萄糖-琼脂培养基250g/瓶用于霉菌和酵母菌计数

11105玉米粉琼脂培养基250g/瓶用于真菌培养

11106马铃薯葡萄糖半固体琼脂250g/瓶用于椰毒假单胞菌酵米面亚种检 验

11107马铃薯葡萄糖水（PD 水）250g/瓶用于椰毒假单胞菌酵米面亚种检 验中 GVC 培养基的制备，每 100ml 培养基中添加 1 支 21101