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钙蛋白酶抑制剂Ⅱ溶液，10mg/mL10mL
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价格：￥电议
更新日期：2026/8/7 17:04:43
生 产 地：中国大陆
产品型号：
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详细内容
钙蛋白酶抑制剂Ⅱ溶液，10mg/mL10mL二：细胞裂解
5. 如果用本产品 A 型，用 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（1 mL 1×PBS 缓冲液+50 uL 溶液 A+ 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液）重悬细菌沉淀，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，一般选 1K-10K 频率处理 15 次，每次20 秒，间隔 1 分钟（必需放置在冰上）。裂解物不能粘稠，否则会堵塞
层析柱。
6. 如果用本产品 B 型，在 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（在 20 mL1×PBS 缓冲液中加入所有 30 mg 溶菌酶干粉，溶解后分装成 1 mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置）中加入 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液和 1 uL Benzonase，用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置 30 分钟，得到细菌裂解物。
7. 将超声或酶法细胞裂解物在 13000 g 4℃离心 10 分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性 GST 标记蛋白。
钙蛋白酶抑制剂Ⅱ溶液，10mg/mL10mL三：层析柱的制备和 GST 蛋白纯化
8. 摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 GST 蛋白产量决定，100 mL 菌液一般使用 200 uL 介质即可）。下列步骤各溶液的用量均针对 200 uL 介质而定，如果介质用量不同，各溶液用量需相应调整。
9. 用 5 mL 预冷的 1×PBS 缓冲液洗柱。
10.将第 7 步得到的上清液（含可溶性 GST 标记蛋白）上柱，让重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于 SDS-PAGE 电泳。GST 和谷胱甘肽之间的结合很缓慢，所以流速一定不能快，否则结合不充分。流速一般在 0.2-1 mL/分钟即可。如要提高 GST 标记蛋白与介质的结合效率，可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合 30 分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
1钙蛋白酶抑制剂Ⅱ溶液，10mg/mL10mL1.用 0.5-2 mL 1×PBS 缓冲液洗柱，收集并保存穿透液（含杂蛋白）。
12.用 0.2-1 mL GST 洗脱液洗柱，收集并保存穿透液（含 GST 标记蛋白）。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在 4℃放置，需立即用于后续处理（如浓度测定或 SDS-PAGE 电泳）或-80℃长期放置。
13.对收集的 2 种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或 SDS-PAGE 分析。注意：如果不预先脱盐，则只能用 Bradford 法或 OD 检测法（1 OD280 约等于 0.5 mg/mL 蛋白）测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于 GST 的分子量为 26 KD，所以在 SDS-PAGE 胶上，GST 标记蛋白将比天然蛋白大 26 KD。
原理及特点:
重组蛋白 N 端的 GST 谷胱甘肽 S 转移酶（Glutathione S Transferase）能提高重组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用 GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合，并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立，是目前分离纯化 GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的，具有下列
特点：
1. 一站式套装，含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达 GST 标记蛋白的细菌（酵母、杆状病毒、培养细胞）即可，非常方便。
2. 专一性强，一次过柱即可获得纯度高达 95%的 GST-标记蛋白。
3. 只能在非变性条件下使用，只可用于纯化没形成包涵体的 GST 标记蛋白。
4. 每次可以处理 20 mL 的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5. 提供 4 mL 浓度为 50%的谷胱甘肽-Agarose 介质，可吸附 5-10 mgGST 标记蛋白质。
6. 本介质可以反复使用多次。
一:重组蛋白的表达和细菌收集
1. 37℃振荡培养 20 mL 含表达质粒的细菌到 OD600=0.6-0.8。
2. 加 IPTG 到终浓度为 0.1 mM，30℃振荡培养 3 小时或 22℃振荡培养 8小时（或过夜）。
3. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清。
4. 用 1×PBS 缓冲液重悬细菌沉淀，4℃ 5000 g 离心 10 分钟，弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。
1080210%氯化钠胰酪胨大豆肉汤250g/瓶用 于 金 黄 色 葡 萄 球 菌 的 增 菌 和MPN 试验
10804Baird-Parker 琼脂基础250g/瓶用于球菌的选择性分 离与计数，每 95ml 培养基中添加1 支 20801
10806肠毒素产毒培养基250g/瓶用于葡萄球菌产毒素检验
10808卵黄氯化钠琼脂培养基250g/瓶用于球菌选择性分离， 每 65ml 培养基中添加 2 支 20804
10809甘露醇氯化钠琼脂培养基250g/瓶用于球菌的选择性分 离和培养
10811甘露醇卵黄培养基250g/瓶用于球菌计数(日本)， 每 100ml 培养基中添加 2 支 21001
10815甲苯胺蓝-DNA 琼脂50g/瓶用于耐热核酸酶试验
10816蛋白胨氯化钠溶液250g/瓶用于葡萄球菌等微生物检验中样 品的制备
10817改良 GC 肉汤基础250g/瓶用于葡萄球菌 MPN 计数，每 9ml单料管中添加 0.1ml20805，每 10ml双料管中添加 0.2ml20805
10820Vogel-Johnson 琼脂基础250g/瓶用于球菌选择性分离， 每 100ml 培养基中添加 1 支 20805
10821兔血浆纤维蛋白原（RPF）琼脂培养基250g/瓶用于凝固酶阳性葡萄球菌检测，需添加 20805、20806、牛纤维蛋白 原、胰酶抑制剂
10822哥伦比亚 CNA 琼脂1000ml/瓶用于革兰氏阳性球菌的分离，也可 羊血制备哥伦比亚 CNA 血琼脂
10823DNA 酶琼脂100g/瓶用于核糖核酸酶检测
10824葡萄球菌增菌肉汤基础250g/瓶用于凝固酶阳性葡萄球菌选择性 增菌，每 100ml 中加入 1 支 20805
10825葡萄球菌培养基250g/瓶用于葡萄球菌的分离（明胶、甘露 醇发酵试验）
1081410%氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤250g/瓶用于球菌的增菌
10829Chapman 琼脂培养基250g/瓶用于球菌的分离培养
10830Chapman Stone 琼脂培养基250g/瓶用于球菌的分离培养
105013%氯化钠碱性蛋白胨水250g/瓶用于副溶血性弧菌选择性增菌
10502TCBS 琼脂250g/瓶用于副溶血性弧菌选择性分离
105033%氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂250g/瓶用于副溶血性弧菌纯化
105043%氯化钠三糖铁琼脂250g/瓶副溶血性弧菌生化试验
10505我妻氏血琼脂基础250g/瓶用于副溶血性弧菌神奈川试验，每100ml 培养基中需添加 5ml50701
10506四号琼脂基础250g/瓶用 于 霍 乱 弧 菌 选 择 性 分 离 ， 每100ml 培养基中添加 2 支 20518
10507庆大霉素琼脂基础250g/瓶用 于 霍 乱 弧 菌 选 择 性 分 离 ， 每100ml 培养基中添加 1 支 20543
钙蛋白酶抑制剂Ⅱ溶液，10mg/mL10mL10508嗜盐菌选择性琼脂250g/瓶含 4%NaCl，用于副溶血性弧菌的纯 化
10509氯化钠多粘菌素 B 肉汤（SPB）基础250g/瓶用于副溶血性弧菌选择性增菌，每100ml 培养基中添加 1 支 20519
10510O/F 试验用培养基250g/瓶用于弧菌葡萄糖利用试验（O/F 试 验）
10511碱性蛋白胨水（APW）250g/瓶用于弧菌选择性增菌
10512氯化钠营养琼脂250g/瓶用于副溶血性弧菌的纯化
10513氯化钠三糖铁琼脂250g/瓶含 1.5%NaCl，用于弧菌生化试验
1051442℃生长试验用培养基250g/瓶用于副溶血性弧菌 42℃生长试验
10517mCPC 琼脂基础（CC 琼脂基础）250g/瓶用于创伤弧菌的选择性分离 。每 90ml 培养基中添加 2 支 20541、1支 20542 和 1 支 21201
10518碱性琼脂250g/瓶用于菌的选择性分离
10519碱性胆盐琼脂250g/瓶用于菌的选择性分离
10520氯化钠蔗糖琼脂培养基250g/瓶用于副溶血性弧菌的分离培养
10521PCA 斜面培养基250g/瓶用于弧菌的保存
10522BTB 培养基250g/瓶用于弧菌的选择性增菌
10523氯化钠结晶紫增菌液250g/瓶用于副溶血性弧菌的选择性增菌
10601改良磷酸盐缓冲液250g/瓶用于小肠结肠炎耶尔森氏菌增菌
10602CIN-1 培养基250g/瓶用于小肠结肠炎耶尔森氏菌分离， 每 100ml 培养基中添加 1 支 20601
10603改良 Y 培养基250g/瓶用于小肠结肠炎耶尔森氏菌分离
10604改良克氏双糖铁培养基250g/瓶用于小肠结肠炎耶尔森氏菌的初 步鉴定
10605改良的酵母浸汁-孟加拉红肉汤250g/瓶用于小肠结肠炎耶尔森氏菌增菌
10606ITC 肉汤基础250g/瓶用于小肠结肠炎耶尔森氏菌的选 择性增菌，每 100ml 培养基中添加1 支 20610
10607SSDC 培养基250g/瓶用于小肠结肠炎耶尔森氏菌的选 择性分离（ISO）
10608DYS 耶尔森菌琼脂250g/瓶用于小肠结肠炎耶尔森氏菌的分 离培养
10901葡萄糖肉浸液肉汤250g/瓶用于溶血性链球菌增菌
10902匹克氏肉汤基础100g/瓶用于溶血性链球菌增菌，每 50ml 培养基中添加 1 支 20902 和脱纤维 兔血（或羊血）2.5ml
10903KF 链球菌琼脂培养基1000ml/瓶含 TTC，用于肠球菌、链球菌滤膜 法计数和检验
