抑氨肽酶，5mg/mL5mL

抑氨肽酶，5mg/mL5mL原理及特点:
重组蛋白 N 端的 GST 谷胱甘肽 S 转移酶（Glutathione S Transferase）能提高重组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用 GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合，并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立，是目前分离纯化 GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的，具有下列
特点：
1. 一站式套装，含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达 GST 标记蛋白的细菌（酵母、杆状病毒、培养细胞）即可，非常方便。
2. 专一性强，一次过柱即可获得纯度高达 95%的 GST-标记蛋白。
3. 只能在非变性条件下使用，只可用于纯化没形成包涵体的 GST 标记蛋白。
4. 每次可以处理 20 mL 的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5. 提供 4 mL 浓度为 50%的谷胱甘肽-Agarose 介质，可吸附 5-10 mgGST 标记蛋白质。
6. 本介质可以反复使用多次。
一:重组蛋白的表达和细菌收集
1. 37℃振荡培养 20 mL 含表达质粒的细菌到 OD600=0.6-0.8。
2. 加 IPTG 到终浓度为 0.1 mM，30℃振荡培养 3 小时或 22℃振荡培养 8小时（或过夜）。
3. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清。
4. 用 1×PBS 缓冲液重悬细菌沉淀，4℃ 5000 g 离心 10 分钟，弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。
抑氨肽酶，5mg/mL5mL二：细胞裂解
5. 如果用本产品 A 型，用 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（1 mL 1×PBS 缓冲液+50 uL 溶液 A+ 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液）重悬细菌沉淀，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，一般选 1K-10K 频率处理 15 次，每次20 秒，间隔 1 分钟（必需放置在冰上）。裂解物不能粘稠，否则会堵塞
层析柱。
6. 如果用本产品 B 型，在 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（在 20 mL1×PBS 缓冲液中加入所有 30 mg 溶菌酶干粉，溶解后分装成 1 mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置）中加入 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液和 1 uL Benzonase，用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置 30 分钟，得到细菌裂解物。
7. 将超声或酶法细胞裂解物在 13000 g 4℃离心 10 分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性 GST 标记蛋白。
抑氨肽酶，5mg/mL5mL三：层析柱的制备和 GST 蛋白纯化
8. 摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 GST 蛋白产量决定，100 mL 菌液一般使用 200 uL 介质即可）。下列步骤各溶液的用量均针对 200 uL 介质而定，如果介质用量不同，各溶液用量需相应调整。
9. 用 5 mL 预冷的 1×PBS 缓冲液洗柱。
10.将第 7 步得到的上清液（含可溶性 GST 标记蛋白）上柱，让重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于 SDS-PAGE 电泳。GST 和谷胱甘肽之间的结合很缓慢，所以流速一定不能快，否则结合不充分。流速一般在 0.2-1 mL/分钟即可。如要提高 GST 标记蛋白与介质的结合效率，可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合 30 分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11.用 0.5-2 mL 1×PBS 缓冲液洗柱，收集并保存穿透液（含杂蛋白）。
12.用 0.2-1 mL GST 洗脱液洗柱，收集并保存穿透液（含 GST 标记蛋白）。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在 4℃放置，需立即用于后续处理（如浓度测定或 SDS-PAGE 电泳）或-80℃长期放置。
13.对收集的 2 种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或 SDS-PAGE 分析。注意：如果不预先脱盐，则只能用 Bradford 法或 OD 检测法（1 OD280 约等于 0.5 mg/mL 蛋白）测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于 GST 的分子量为 26 KD，所以在 SDS-PAGE 胶上，GST 标记蛋白将比天然蛋白大 26 KD。

11030强化梭菌琼脂250g/瓶用于梭菌的分离培养

11035SC 琼脂基础250g/瓶用于产气荚膜梭菌的计数和培养（ISO），需添加 21009 及 21001

11001庖肉培养基250g/瓶用于梭菌或其它厌氧菌的培养，需 添加适量 11002（GB、SN）

11055CW 琼脂基础（不含卡那霉素）250g/瓶用于加热材料魏氏梭菌的检验，需 添加卵黄盐水悬液（21001）或脱 纤维血液（日本）

11056CW 琼脂基础（含卡那霉素）250g/瓶用于加热材料魏氏梭菌的检验，需 添加卵黄盐水悬液（21001）或脱 纤维血液（日本）

10701Bolton 肉汤基础250g/瓶用于弯曲菌选择性增菌，每 100ml培养基中添加 1 支 20701

10702Skirrow 琼脂基础 250g/瓶用于弯曲菌选择性分离，每 100ml培养基中添加 20702、20703 各 1 支；若添加 1 支 20712 和 7%羊血 则组成改良 Skirrow 琼脂

10703改良 CCD 琼脂基础250g/瓶用于弯曲菌选择性分离，每 100ml培养基中添加 1 支 20702

10705布氏肉汤250g/瓶用于弯曲菌分离及动力试验

10707布氏琼脂250g/瓶用于弯曲菌、菌属分离

10709改良 CCDA 培养基250g/瓶用于弯曲菌选择性分离，每 100ml培养基中添加 1 支 20711

10708Bolton 增菌培养基250g/瓶用于弯曲菌选择性增菌，每 100ml培养基中添加 1 支 20710

10712Campy-Cefex 琼脂培养基250g/瓶每 200ml 培养基中添加 10ml 马血和 1 支 20716 ；若制备 改良 Campy-Cefex 琼脂，每 200ml 培养 基中添加 10ml 马血和 1 支 20718

10713改良 Camp-BAP 琼脂基础250g/瓶用 于 弯 曲 杆 菌 选 择 性 分 离 ， 每100ml 培养基中添加 20719、20720各 1 支

20719改良 Camp-BAP 琼脂基础添加剂 11ml×10 支/盒

20720改良 Camp-BAP 琼脂基础添加剂 21ml×10 支/盒

11301BBL 琼脂培养基250g/瓶用于双歧杆菌分离培养

11302PYG 液体培养基250g/瓶用于双歧杆菌乙酸和乳酸代谢物测 定，每 100ml 培养基中添加 1 支21301 和 1 支 21319

11303TPY 液体培养基250g/瓶双歧杆菌 F6PPK 测定

11304MRS 培养基250g/瓶用于乳酸菌平板计数，每 100ml 培 养基中添加 1 支 21302 制成改良 MRS 培养基

11305MC 培养基250g/瓶用于乳酸菌平板计数，每 100ml 培 养基中添加 1 支 21201 制成改良 MC 培养基

11306双歧杆菌生化管用基础培养基100g/瓶双歧杆菌糖发酵生化试验

抑氨肽酶，5mg/mL5mL11307MRS 肉汤250g/瓶用于乳酸菌增菌

11308改良番茄汁琼脂培养基250g/瓶用于乳酸菌总数测定

11309TPY 琼脂培养基250g/瓶用于双歧杆菌的分离培养

11310双歧杆菌 BS 培养基250g/瓶用于双歧杆菌的分离培养

11311BLB 培养基250g/瓶用于双歧杆菌的分离培养

11312乳酸杆菌选择性琼脂（LBS 琼脂）250g/瓶用于乳酸菌的选择性分离和培养，每1L 培养基中需添加 1.32ml 冰乙酸

11313乳酸杆菌选择性肉汤（LBS 肉汤）250g/瓶用于乳酸菌的选择性培养，每 1L 培 养基中需添加 1.32ml 冰乙酸

11314M17 琼脂1000ml/瓶用于牛奶和乳制品中乳酸菌的检测， 并分离被感染的乳酸菌

11315M17 肉汤1000ml/瓶用于牛奶和乳制品中乳酸菌的检测

11316APT 琼脂250g/瓶用于乳酸菌的分离培养

11318Raka-Ray 3 号培养基250g/瓶用于啤酒和酿造过程中乳酸菌的分 离

11319溴甲酚紫平板计数琼脂BCP250g/瓶用于乳酸菌总数测定

11320含糖牛肉汤培养基250g/瓶用于乳酸菌培养和鉴别

11322含糖牛肉汤琼脂培养基250g/瓶用于乳酸菌计数

11323LAMVAB 琼脂基础250g/瓶用于乳酸杆菌的分离，每 100ml 培 养基中添加 1 支 21501

11046苛养厌氧菌肉汤250g/瓶用于厌氧菌的增菌培养，含 0.075%琼脂

11051碎肉肉汤基础250g/瓶用于厌氧菌特别是专性厌氧菌的 培养、增菌和修复，含维生素 K， 需添加 11002（庖肉牛肉粒）

11052碎肉葡萄糖肉汤基础250g/瓶用于厌氧菌特别是专性厌氧菌的 培养、增菌和修复，含维生素 K， 需添加 11002（庖肉牛肉粒）

11053碎肉碳水化合物肉汤基础250g/瓶用于厌氧菌特别是专性厌氧菌的 培养、增菌和修复，含维生素 K， 需添加 11002（庖肉牛肉粒）

11036普通啤酒琼脂培养基250g/瓶用于啤酒腐败菌、厌氧菌的检测

11037改良 NBB 琼脂基础250g/瓶用于啤酒中厌氧菌的检测

11043需氧-厌氧菌琼脂培养基250g/瓶用于灭菌与消毒鉴定试验

11044AN 厌氧琼脂基础250g/瓶厌氧基础培养基，每 100ml 培养基 中添加 1 支 21004 和 1 支 21005

11031Wilkins-Chalgren 琼脂250g/瓶用于厌氧菌的分离培养

11032厌氧菌肉汤250g/瓶用于肉汤微量稀释法测定厌氧菌 敏感性试验培养，也可用于厌氧菌 培养

11033CDC 厌氧菌琼脂基础250g/瓶用于厌氧菌的分离培养，每 100ml培养基中添加 1 支 21004 和 1 支21005，并添加 5%~10%50701

11034厌氧菌琼脂250g/瓶用于厌氧菌的分离培养

11025Schaedler 琼脂250g/瓶用于厌氧菌的分离培养，视情况加 入 VK1 和脱纤维羊血

11026Schaedler 肉汤250g/瓶用于厌氧菌的增菌

11057CHO 培养基250g/瓶加入不同碳源用于厌氧菌的鉴别 试验

11047厌氧基础肉汤250g/瓶用于厌氧微生物，尤其是拟杆菌和 其它苛养厌氧菌的培养

11058厌氧基础琼脂250g/瓶用于厌氧微生物，尤其是拟杆菌和 其它苛养厌氧菌的培养，灭菌后需 添加 5-10%脱纤维羊血

11038GAM 肉汤250g/瓶用于厌氧菌的培养，若需要，每100ml 培养基中可选择性添加添加1 支 21004 和 1 支 21005

11059GAM 半固体培养基250g/瓶用于厌氧菌的保存，若需要，每100ml 培养基中可选择性添加 1 支21004 和 1 支 21005

11040GAM 琼脂250g/瓶用于厌氧菌的培养，若需要，每100ml 培养基中可选择性添加 1 支21004 和 1 支 21005

11041改良 GAM 肉汤基础250g/瓶用于厌氧菌培养，每 100ml 培养基 中添加 21004、21005,可选择性添 加 21006、21007、21008 各 1 支

11042改良 GAM 琼脂基础250g/瓶用于厌氧菌培养，每 100ml 培养基 中添加 21004、21005,可选择性添 加 21006、21007、21008 各 1 支

12117BDS 培养基250g/瓶用于培养拟杆菌

12146拟杆菌胆汁七叶苷琼脂基础（BBE）250g/瓶用于脆弱拟杆菌的快速分离，每100ml 培养基中添加 2 支 21004 和5 支 20102

11201肉浸液肉汤250g/瓶用于蜡样芽胞杆菌的纯培养

11202甘露醇卵黄多粘菌素琼脂基础(MYP)250g/瓶用于蜡样芽胞杆菌的计数、分离， 每 100ml 培养基中添加 1 支 21001 和 1 支 21201

11203酪蛋白琼脂250g/瓶用于蜡样芽胞杆菌的酪蛋白分解 试验

11205酚红葡萄糖肉汤250g/瓶用于葡萄糖分解试验