联系我们
联系人：吴菲
产品展示
抗凝血酶Ⅲ，10mg/mL1mL
点击次数：490
价格：￥电议
更新日期：2026/8/7 17:04:43
生 产 地：中国大陆
产品型号：
- 电话: 02*******773
- 手机: 18******584
- 微信:
- 交换名片后展示联系方式 → →
详细内容
抗凝血酶Ⅲ，10mg/mL1mL原理及特点:
重组蛋白 N 端的 GST 谷胱甘肽 S 转移酶（Glutathione S Transferase）能提高重组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用 GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合，并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立，是目前分离纯化 GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的，具有下列
特点：
1. 一站式套装，含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达 GST 标记蛋白的细菌（酵母、杆状病毒、培养细胞）即可，非常方便。
2. 专一性强，一次过柱即可获得纯度高达 95%的 GST-标记蛋白。
3. 只能在非变性条件下使用，只可用于纯化没形成包涵体的 GST 标记蛋白。
4. 每次可以处理 20 mL 的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5. 提供 4 mL 浓度为 50%的谷胱甘肽-Agarose 介质，可吸附 5-10 mgGST 标记蛋白质。
6. 本介质可以反复使用多次。
一:重组蛋白的表达和细菌收集
抗凝血酶Ⅲ，10mg/mL1mL1. 37℃振荡培养 20 mL 含表达质粒的细菌到 OD600=0.6-0.8。
2. 加 IPTG 到终浓度为 0.1 mM，30℃振荡培养 3 小时或 22℃振荡培养 8小时（或过夜）。
3. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清。
4. 用 1×PBS 缓冲液重悬细菌沉淀，4℃ 5000 g 离心 10 分钟，弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。
二：细胞裂解
5. 如果用本产品 A 型，用 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（1 mL 1×PBS 缓冲液+50 uL 溶液 A+ 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液）重悬细菌沉淀，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，一般选 1K-10K 频率处理 15 次，每次20 秒，间隔 1 分钟（必需放置在冰上）。裂解物不能粘稠，否则会堵塞
层析柱。
6. 如果用本产品 B 型，在 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（在 20 mL1×PBS 缓冲液中加入所有 30 mg 溶菌酶干粉，溶解后分装成 1 mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置）中加入 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液和 1 uL Benzonase，用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置 30 分钟，得到细菌裂解物。
7. 将超声或酶法细胞裂解物在 13000 g 4℃离心 10 分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性 GST 标记蛋白。
抗凝血酶Ⅲ，10mg/mL1mL三：层析柱的制备和 GST 蛋白纯化
8. 摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 GST 蛋白产量决定，100 mL 菌液一般使用 200 uL 介质即可）。下列步骤各溶液的用量均针对 200 uL 介质而定，如果介质用量不同，各溶液用量需相应调整。
9. 用 5 mL 预冷的 1×PBS 缓冲液洗柱。
10.将第 7 步得到的上清液（含可溶性 GST 标记蛋白）上柱，让重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于 SDS-PAGE 电泳。GST 和谷胱甘肽之间的结合很缓慢，所以流速一定不能快，否则结合不充分。流速一般在 0.2-1 mL/分钟即可。如要提高 GST 标记蛋白与介质的结合效率，可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合 30 分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11.用 0.5-2 mL 1×PBS 缓冲液洗柱，收集并保存穿透液（含杂蛋白）。
12.用 0.2-1 mL GST 洗脱液洗柱，收集并保存穿透液（含 GST 标记蛋白）。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在 4℃放置，需立即用于后续处理（如浓度测定或 SDS-PAGE 电泳）或-80℃长期放置。
13.对收集的 2 种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或 SDS-PAGE 分析。注意：如果不预先脱盐，则只能用 Bradford 法或 OD 检测法（1 OD280 约等于 0.5 mg/mL 蛋白）测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于 GST 的分子量为 26 KD，所以在 SDS-PAGE 胶上，GST 标记蛋白将比天然蛋白大 26 KD。
O157显色培养基1000ml用于O157菌的显色培养
沙门氏菌显色培养基1000ml用于沙门氏菌的显色培养
李斯特氏菌显色培养基1000ml用于李斯特氏菌的显色培养
球显色培养基1000ml用于球菌的显色培养
霉菌和酵母菌显色培养基1000ml用于霉菌和酵母菌的显色培养
弧菌显色培养基1000ml用于弧菌的显色培养，副溶血性弧菌显蓝色，其它弧菌显无色。
坂崎杆菌显色培养基1000ml用于坂崎杆菌的显色培养，坂崎杆菌显蓝色，其它肠杆菌显无色。
尿道定位显色培养基1000ml用于分离和鉴别常见尿道致病菌
O157
山梨醇麦康凯琼脂基础(SMAC) 250用于0157的分离培养(SN标准)
噻孢霉素 A1.25μg/支*5添加于100ml HB0121中
1%亚碲酸钾溶液5ml*10适量添加于HB0121
mEC 肉汤 250用于0157选择性增菌(USDA-FSIS方法)
mTSB肉汤250用于0157选择性增菌(ISO方法)
新生霉素A2mg/支*5添加于100ml mEC肉汤和mTSB肉汤中用于0157选择性增菌
SD-39琼脂250用于滤膜法0157的分离培养(NEOGEN方法)
平板计数琼脂（PCA）国际标准平板计数琼脂,含糖,用于细菌总数的测定(SN标准)
4-甲基伞形酮-D-葡萄糖醛酸苷0.01g添加于100ml HB0102中用于及0157鉴定
煌绿乳糖胆盐肉汤 （BGLB） 用于大肠菌群、的测定(SN标准)
EC 肉汤 用于粪大肠菌群、的测定(SN标准)
抗凝血酶Ⅲ，10mg/mL1mL伊红美蓝琼脂 (EMB)弱选择性培养基、用于分离肠道致病菌，特别是(SN标准)
营养肉汤 (NB) 一般细菌培养、转种、复壮、增菌等(GB标准)
营养琼脂 (NA) 细菌计数、不含糖，可作血琼脂基础和传代用(GB标准)
乳糖胆盐发酵培养基 用于大肠菌群，粪大肠菌群，的测定(GB标准)
乳糖复发酵培养基 用于大肠菌群,粪大肠菌群,的测定(GB标准)
去氧胆酸盐琼脂 用于固体平板测定,肠道菌选择性分离
MR-VP培养基 用于的甲基红和VP试验(SN标准)
结晶紫中性红胆盐琼脂 (VRBA) 用于大肠菌群的固体平板检测(SN标准)
西蒙氏枸橼酸盐琼脂 用于肠道菌的柠檬酸盐利用试验(GB标准)
肠道菌计数琼脂 (VRBDA) 用于肠道菌计数和肠杆菌科鉴别(MERCK方法)
菌种保存培养基 用于常用细菌斜面传代及室温保存
乳糖蛋白胨培养液 用于饮用水，水源水中总大肠菌群的测定(GB标准)
Cary-Blair 氏运送培养基 250用于运送肠道致病菌标本
哥伦比亚血琼脂基础250营养非常丰富，用各种细菌的基础培养基(AFNOR EP IDF标准)
亮绿乳糖培养基 250用于饮用天然矿泉水中的检验(GB标准)
肠道菌增菌肉汤(EE肉汤) 250用于肠道菌的增菌培养(GB、FDA标准)
TTC营养琼脂 250用于细菌总数测定
LB肉汤 250用于细菌培养
LB营养琼脂 250用于细菌培养
苯丙氨酸脱氨酶培养基 100用于苯丙氨酸脱氨酶试验
哥伦比亚MUG培养基250用于的荧光检测(SN标准)
2216E琼脂250用于海生细菌的培养和计数
肠球菌琼脂(胆盐－七叶苷－叠氮钠琼脂)250用于肠球菌和肠道致病菌的分离培养(Acumedia方法)
BDS培养基250用于培养拟杆菌
葡萄糖琼脂250用于细菌的综合生化试验
Andrade氏糖类肉汤250用于细菌的糖发酵试验
Korser氏枸椽酸盐肉汤100用于细菌枸椽酸盐试验(SN标准)
Endo 培养基250用于大肠菌群的确诊试验(APHA)
缓冲MUG琼脂100用于滤膜MUG法检测食品中数(SN/T1059.2)
乳糖莫能霉素葡萄糖醛酸琼脂250用于滤膜MUG法检测食品中大肠菌群数(SN/T1059.2)
茜素-β-半乳糖苷琼脂250用于食品、饮料和饮用水中大肠菌群快速检测和计数(GB/T)
Tergitol⁻⁷ 琼脂250用于大肠菌群的鉴定(NMKL)
TTC 溶液(0.125%)2ml*10添加于HB0127中
标准I号营养琼脂250标准细菌计数、含糖(MERCK方法)
标准II号营养琼脂250细菌计数、不含糖，可作血琼脂基础和传代用(MERCK方法)
A1 培养基250用于检测水中的大肠菌群(US-EPA标准)
哥伦比亚CNA琼脂基础用于分离革兰氏阳性球菌(Acumedia方法)
m-FC 琼脂用于大肠菌群的滤膜法检测(MERCK方法)
m-FC肉汤用于大肠菌群的滤膜法检测(MERCK方法)
滤膜肠球菌琼脂用于肠球菌的滤膜法检测(MERCK方法)
酵母粉琼脂用于水中细菌总数的检测(ISO标准)
去氧胆酸盐枸椽酸盐乳糖蔗糖琼脂用于致病性肠杆菌的分离培养
去氧胆酸盐枸椽酸盐琼脂用于细菌总数的测定和分离培养
