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α2巨球蛋白25Inh.U
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价格：￥电议
更新日期：2026/8/7 17:04:43
生 产 地：中国大陆
产品型号：
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详细内容
α2巨球蛋白25Inh.U原理及特点:
重组蛋白 N 端的 GST 谷胱甘肽 S 转移酶（Glutathione S Transferase）能提高重组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用 GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合，并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立，是目前分离纯化 GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的，具有下列
特点：
1. 一站式套装，含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达 GST 标记蛋白的细菌（酵母、杆状病毒、培养细胞）即可，非常方便。
2. 专一性强，一次过柱即可获得纯度高达 95%的 GST-标记蛋白。
3. 只能在非变性条件下使用，只可用于纯化没形成包涵体的 GST 标记蛋白。
4. 每次可以处理 20 mL 的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5. 提供 4 mL 浓度为 50%的谷胱甘肽-Agarose 介质，可吸附 5-10 mgGST 标记蛋白质。
6. 本介质可以反复使用多次。
α2巨球蛋白25Inh.U一:重组蛋白的表达和细菌收集
1. 37℃振荡培养 20 mL 含表达质粒的细菌到 OD600=0.6-0.8。
2. 加 IPTG 到终浓度为 0.1 mM，30℃振荡培养 3 小时或 22℃振荡培养 8小时（或过夜）。
3. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清。
4. 用 1×PBS 缓冲液重悬细菌沉淀，4℃ 5000 g 离心 10 分钟，弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。
二：细胞裂解
5. 如果用本产品 A 型，用 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（1 mL 1×PBS 缓冲液+50 uL 溶液 A+ 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液）重悬细菌沉淀，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，一般选 1K-10K 频率处理 15 次，每次20 秒，间隔 1 分钟（必需放置在冰上）。裂解物不能粘稠，否则会堵塞
层析柱。
6. 如果用本产品 B 型，在 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（在 20 mL1×PBS 缓冲液中加入所有 30 mg 溶菌酶干粉，溶解后分装成 1 mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置）中加入 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液和 1 uL Benzonase，用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置 30 分钟，得到细菌裂解物。
7. 将超声或酶法细胞裂解物在 13000 g 4℃离心 10 分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性 GST 标记蛋白。
α2巨球蛋白25Inh.U三：层析柱的制备和 GST 蛋白纯化
8. 摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 GST 蛋白产量决定，100 mL 菌液一般使用 200 uL 介质即可）。下列步骤各溶液的用量均针对 200 uL 介质而定，如果介质用量不同，各溶液用量需相应调整。
9. 用 5 mL 预冷的 1×PBS 缓冲液洗柱。
10.将第 7 步得到的上清液（含可溶性 GST 标记蛋白）上柱，让重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于 SDS-PAGE 电泳。GST 和谷胱甘肽之间的结合很缓慢，所以流速一定不能快，否则结合不充分。流速一般在 0.2-1 mL/分钟即可。如要提高 GST 标记蛋白与介质的结合效率，可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合 30 分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11.用 0.5-2 mL 1×PBS 缓冲液洗柱，收集并保存穿透液（含杂蛋白）。
12.用 0.2-1 mL GST 洗脱液洗柱，收集并保存穿透液（含 GST 标记蛋白）。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在 4℃放置，需立即用于后续处理（如浓度测定或 SDS-PAGE 电泳）或-80℃长期放置。
13.对收集的 2 种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或 SDS-PAGE 分析。注意：如果不预先脱盐，则只能用 Bradford 法或 OD 检测法（1 OD280 约等于 0.5 mg/mL 蛋白）测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于 GST 的分子量为 26 KD，所以在 SDS-PAGE 胶上，GST 标记蛋白将比天然蛋白大 26 KD。
改良MSRV培养基250用于沙门氏的分离培养(MERCK方法)
SCCRAM肉汤250滤膜法食品中沙门氏菌前增菌(SN/T1059.1)
BPL琼脂250用于食品中沙门氏菌选择性分离培养(Merck方法)
改良BPLS琼脂250用于各种标本中沙门氏菌选择性分离培养(ISO标准)
MIO培养基250用于动力、吲哚和鸟氨酸试验(FDA方法)
XLT4琼脂250用于食品中致病菌，特别是沙门氏菌分离培养(Merck方法)
Ｄ/E中和肉汤250用于卫生环境中微生物的分离培养(ACUMEDIA方法)
Ｄ/E中和琼脂250用于卫生环境中微生物的分离培养(ACUMEDIA方法)
M –肉汤250用于干燥食品和种子中沙门氏菌增菌培养(MERCK方法)
煌绿琼脂250用于沙门氏菌的分离培养(Acumedia方法)
煌绿黄胺嘧啶琼脂250用于沙门氏菌的分离培养(Acumedia方法)
BGS 琼脂250用于沙门氏菌的分离培养(USDA-FSIS方法)
碱性蛋白胨水 250用于菌选择性增菌培养(SN标准)
TCBS琼脂 250用于致病性弧菌的选择性分离（GB、SN标准）
氯化钠多粘菌素B肉汤基础(SCPB) 250用于副溶血性弧菌选择性增菌培养，用前应无菌加入多粘菌素B（SN标准）
多粘菌素B 2.5万单位/支*5添加于100mlHB4131中
精氨酸双水解酶试验用培养基(AD)5生化培养基，用于弧菌的精氨酸试验
四号琼脂基础 250用于菌选择性分离培养，灭菌冷至50℃加入亚碲酸钾，倒平板
我妻氏培养基基础 250用于神奈川现象试验（SN标准）
60%/L氯化钠蛋白胨肉汤 250用于副溶血性弧菌的前增菌培养
α2巨球蛋白25Inh.U氯化钠三糖铁 250用于副溶血性弧菌的生化反应筛选（SN标准）
胰胨大豆琼脂斜面（TSA） 250培养副溶血性弧菌，做细胞色素氧化酶实验（SN标准）
42℃生长培养基 250用于副溶血性弧菌42℃生长试验
O/F培养基(HLGB) 250用于鉴别弧菌葡萄糖代谢类型（发酵型或氧化型）（SN标准）
氯化钠结晶紫增菌液 250用于副溶血性弧菌的选择性增菌培养（GB标准）
氯化钠蔗糖琼脂 250用于副溶血性弧菌的选择性分离培养（GB标准）
嗜盐菌选择性琼脂 250用于副溶血性弧菌的选择性分离培养（GB标准）
氯化钠血琼脂基础 250用于副溶血性弧菌的溶血试验
霍乱双糖铁琼脂(KIA)250用于菌的生化试验（SN标准）
T1N1 琼脂 250用于菌的培养（SN标准）
T1N0 肉汤 250用于菌的生长试验（SN标准）
T1N3 肉汤 250用于菌的生长试验（SN标准）
精氨酸葡萄糖斜面琼脂 100用于菌的复合生化试验（SN标准）
mCPC 培养基250用于弧菌分离培养(FDA标准)
mCPC培养基添加剂1ml*5每瓶添加于100ml mCPC培养基中
副溶血性弧菌琼脂250用于副溶血性弧菌的选择性分离培养
副溶血性弧菌增菌液250用于副溶血性弧菌的增菌培养
酵母 霉菌 青霉 曲霉
察氏琼脂 250用于青霉、曲霉鉴定及保存菌种用
产毒培养基 250用于青霉、曲霉的产毒培养
马铃薯葡萄糖琼脂 (PDA) 250用于霉菌、酵母菌计数(GB标准)
高盐察氏琼脂 250用于霉菌和酵母菌的计数(GB标准)
玉米粉琼脂 250用于真菌培养
孟加拉红培养基 250用于食品中霉菌及酵母菌总数测定
酵母粉葡萄糖氯霉素琼脂250用于食品中霉菌及酵母菌总数测定
Candida Elective 琼脂250用于食品中Candida及酵母菌总数测定(Merck方法)
DTM培养基250用于食品中真菌的培养(Merck方法)
DRBC琼脂250用于食品中霉菌及酵母菌分离培养
WORT 琼脂250用于真菌,特别是酵母菌的计数和增菌培养(Merck方法)
WORT 肉汤250用于真菌,特别是酵母菌的培养(Merck方法)
YGC琼脂250用于奶和奶制品中霉菌及酵母菌分离培养(ISO方法)
改良绿色酵母菌和真菌肉汤250用于饮料中真菌及酵母菌检测(Acumedia方法)
Littman 琼脂250用于真菌的分离培养(Acumedia方法)
DG-18琼脂250用于食品中霉菌和酵母菌分离培养(Acumedia方法)
YM琼脂250用于霉菌、酵母菌及耐酸菌的分离培养(Acumedia方法)
YM11琼脂250滤膜法用于霉菌、酵母菌的分离培养(NEOGEN方法)
OGY琼脂250用于霉菌和酵母菌分离培养和计数(Merck方法)
WL营养琼脂250用于啤酒和发酵产品中酵母菌和细菌的计数
改良沙氏琼脂培养基 250用于真菌检测
