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组织培养基蛋白酶抑制剂1mL
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价格：￥电议
更新日期：2026/8/7 17:04:43
生 产 地：中国大陆
产品型号：
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详细内容
组织培养基蛋白酶抑制剂1mL二：细胞裂解
5. 如果用本产品 A 型，用 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（1 mL 1×PBS 缓冲液+50 uL 溶液 A+ 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液）重悬细菌沉淀，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，一般选 1K-10K 频率处理 15 次，每次20 秒，间隔 1 分钟（必需放置在冰上）。裂解物不能粘稠，否则会堵塞
层析柱。
6. 如果用本产品 B 型，在 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（在 20 mL1×PBS 缓冲液中加入所有 30 mg 溶菌酶干粉，溶解后分装成 1 mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置）中加入 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液和 1 uL Benzonase，用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置 30 分钟，得到细菌裂解物。
7. 将超声或酶法细胞裂解物在 13000 g 4℃离心 10 分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性 GST 标记蛋白。
三：层析柱的制备和 GST 蛋白纯化
8. 摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 GST 蛋白产量决定，100 mL 菌液一般使用 200 uL 介质即可）。下列步骤各溶液的用量均针对 200 uL 介质而定，如果介质用量不同，各溶液用量需相应调整。
9. 用 5 mL 预冷的 1×PBS 缓冲液洗柱。
10.将第 7 步得到的上清液（含可溶性 GST 标记蛋白）上柱，让重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于 SDS-PAGE 电泳。GST 和谷胱甘肽之间的结合很缓慢，所以流速一定不能快，否则结合不充分。流速一般在 0.2-1 mL/分钟即可。如要提高 GST 标记蛋白与介质的结合效率，可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合 30 分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11.用 0.5-2 mL 1×PBS 缓冲液洗柱，收集并保存穿透液（含杂蛋白）。
12.用 0.2-1 mL GST 洗脱液洗柱，收集并保存穿透液（含 GST 标记蛋白）。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在 4℃放置，需立即用于后续处理（如浓度测定或 SDS-PAGE 电泳）或-80℃长期放置。
13.对收集的 2 种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或 SDS-PAGE 分析。注意：如果不预先脱盐，则只能用 Bradford 法或 OD 检测法（1 OD280 约等于 0.5 mg/mL 蛋白）测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于 GST 的分子量为 26 KD，所以在 SDS-PAGE 胶上，GST 标记蛋白将比天然蛋白大 26 KD。
组织培养基蛋白酶抑制剂1mL原理及特点:
重组蛋白 N 端的 GST 谷胱甘肽 S 转移酶（Glutathione S Transferase）能提高重组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用 GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合，并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立，是目前分离纯化 GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的，具有下列
特点：
1. 一站式套装，含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达 GST 标记蛋白的细菌（酵母、杆状病毒、培养细胞）即可，非常方便。
2. 专一性强，一次过柱即可获得纯度高达 95%的 GST-标记蛋白。
3. 只能在非变性条件下使用，只可用于纯化没形成包涵体的 GST 标记蛋白。
4. 每次可以处理 20 mL 的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5. 提供 4 mL 浓度为 50%的谷胱甘肽-Agarose 介质，可吸附 5-10 mgGST 标记蛋白质。
6. 本介质可以反复使用多次。
一:重组蛋白的表达和细菌收集
1. 37℃振荡培养 20 mL 含表达质粒的细菌到 OD600=0.6-0.8。
2. 加 IPTG 到终浓度为 0.1 mM，30℃振荡培养 3 小时或 22℃振荡培养 8小时（或过夜）。
3. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清。
4. 用 1×PBS 缓冲液重悬细菌沉淀，4℃ 5000 g 离心 10 分钟，弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。
沙氏BHI琼脂250用于真菌检测(Acumedia 方法)
菌种培养基 250用于四环素检定中蜡样芽孢杆菌的培养(SN标准)
四环素检定琼脂 250用于四环素残留的微生物学检定(SN标准)
葡萄糖胰蛋白胨琼脂250用于嗜热菌芽孢(需氧芽孢总数、平酸芽孢和厌氧芽孢)分离培养(SN标准)
弯曲菌
布氏琼脂 250用于弯曲杆菌分离(SN标准)
布氏肉汤 250用于弯曲杆菌增菌肉汤和布氏琼脂制备(SN标准)
改良Skirrow氏琼脂基础 250用于空肠弯曲菌的分离培养(SN 、GB标准)
改良Camp-BAP氏琼脂基础250用于弯曲杆菌选择性分离培养(GB标准)
TTC 琼脂基础 250用于弯曲杆菌的TTC试验（GB标准）
甘氨酸培养基 250用于弯曲杆菌甘氨酸耐受性试验（GB标准）
快速硫化氢试验琼脂 250用于弯曲杆菌的硫化氢试验（GB标准）
DNA酶甲基绿琼脂基础 100用于弯曲杆菌的DNA酶水解试验（GB标准）
马尿酸钠培养基100用于弯曲杆菌的马尿酸钠水解试验（GB标准）
快速硫化氢(H2S)试验琼脂250用于弯曲杆菌的硫化氢试验（GB标准）
波尔顿选择性增菌肉汤250用于弯曲杆菌选择性增菌培养(Merck方法)
CCDA基础250用于弯曲杆菌分离培养(WHO方法)
组织培养基蛋白酶抑制剂1mLCCDA添加剂2ml*10支每支添加于200mlCCDA基础中
Campy-Cefex 琼脂基础250用于弯曲杆菌分离培养(FDA方法)
Campy-Cefex 添加剂2ml*10每支添加于200ml Campy-Cefex 琼脂基础中
蜡样芽孢杆菌
甘露醇卵黄多粘菌素琼脂基础（MYP） 250用于蜡样芽孢杆菌的固体平板计数（GB.SN标准）
胰酪胨大豆多粘菌素肉汤基础 250用于蜡样芽孢杆菌的MPN值测定 (SN标准)
改良V-P培养基 250用于蜡样芽孢杆菌的V-P试验(SN标准)
胰酪胨大豆羊血琼脂基础 250用于蜡样芽孢杆菌的溶血测试验(SN标准)
酪蛋白琼脂 250用于蜡样芽孢杆菌的酪蛋白分解试验 (GB标准)
酚红葡萄糖肉汤250用于蜡样芽孢杆菌葡萄糖分解试验(SN标准)
木糖-明胶培养基250用于蜡样芽孢杆菌明胶液化试验
腊样芽胞杆菌选择琼脂基础250用于腊样芽胞杆菌选择性分离培养
葡萄糖酪胨琼脂250用于食品中腊样芽胞杆菌鉴定和计数(APHA方法)
D-环丝氨酸 0.1g/支*2加入250ml TSC琼脂基础中
产芽孢肉汤 250用于产气荚膜梭菌的产芽孢培养
多粘菌素B 1.2mg/支*5用1ml无菌水溶解后添加于100ml HB0256中
多价蛋白胨-酵母膏 (PY) 培养基 250用于产气荚膜梭菌的培养(SN标准)
疱肉牛肉粒 100加入疱肉基础中，配成疱肉培养基
卵黄琼脂培养基基础 250用于肉毒梭菌、产气荚膜梭菌的分离培养（GB标准）
含铁牛奶培养基250用于产气荚膜梭菌的牛奶发酵试验
产气荚膜梭菌 肉毒梭菌 厌氧菌
强化梭菌鉴别琼脂(DRCA)250用于食品和其它物质中梭菌的计数和培养(MERCK方法)
强化梭菌琼脂250用于梭菌的分离培养(MERCK方法)
强化梭菌培养基(RCM)250用于梭菌的分离培养(Merck方法)
TSN 琼脂250用于产气荚膜梭菌的平板计数(Merck方法)
TBB 培养基250用于乳酪产品中梭菌的计数(Merck方法)
CHO培养基基础250用于厌氧菌的糖生化反应(Acumedia 方法)
SCHAEDLER 琼脂250用于厌氧菌的分离培养(Acumedia 方法)
WILKINS-CHALGREN琼脂250用于厌氧菌的分离培养(Acumedia 方法)
MCP琼脂250用于产气荚膜梭菌的计数和培养(Acumedia 方法)
厌氧菌琼脂250用于厌氧菌分离培养
CDC厌氧菌琼脂250用于厌氧菌分离培养(Acumedia 方法)
溶血性链球菌
葡萄糖肉浸液肉汤 250用于溶血性链球菌的增菌培养（GB标准）
匹克 匹克氏肉汤基础A 100用于溶血性链球菌的增菌培养 （GB标准）
肉浸液肉汤培养基 250用于溶血性链球菌、蜡样芽孢杆菌和球菌的增菌培养（GB标准）
叠氮钠葡萄糖肉汤 250用于链球菌的增菌培养
KF链球菌琼脂 100用于链球菌的选择性分离及计数（SN标准）
LIM培养基250用于链球菌的分离培养(Japan方法)
BETA-SSA 琼脂250用于链球菌的选择性分离培养(ACUMEDIA方法)
小肠结肠炎耶尔森氏菌
改良Y培养基 250用于分离小肠结肠炎耶尔森氏菌 （GB标准）
改良磷酸盐缓冲液PSB 250用于小肠结肠炎耶尔森氏菌冷增菌培养 （GB标准）
