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小鼠抗 Flag 标签单抗100μL
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更新日期：2026/8/7 17:04:43
生 产 地：中国大陆
产品型号：
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详细内容
小鼠抗 Flag 标签单抗100μL二：细胞裂解
5. 如果用本产品 A 型，用 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（1 mL 1×PBS 缓冲液+50 uL 溶液 A+ 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液）重悬细菌沉淀，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，一般选 1K-10K 频率处理 15 次，每次20 秒，间隔 1 分钟（必需放置在冰上）。裂解物不能粘稠，否则会堵塞
层析柱。
6. 如果用本产品 B 型，在 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（在 20 mL1×PBS 缓冲液中加入所有 30 mg 溶菌酶干粉，溶解后分装成 1 mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置）中加入 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液和 1 uL Benzonase，用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置 30 分钟，得到细菌裂解物。
7. 将超声或酶法细胞裂解物在 13000 g 4℃离心 10 分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性 GST 标记蛋白。
三：层析柱的制备和 GST 蛋白纯化
8. 摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 GST 蛋白产量决定，100 mL 菌液一般使用 200 uL 介质即可）。下列步骤各溶液的用量均针对 200 uL 介质而定，如果介质用量不同，各溶液用量需相应调整。
9. 用 5 mL 预冷的 1×PBS 缓冲液洗柱。
10.将第 7 步得到的上清液（含可溶性 GST 标记蛋白）上柱，让重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于 SDS-PAGE 电泳。GST 和谷胱甘肽之间的结合很缓慢，所以流速一定不能快，否则结合不充分。流速一般在 0.2-1 mL/分钟即可。如要提高 GST 标记蛋白与介质的结合效率，可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合 30 分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11.用 0.5-2 mL 1×PBS 缓冲液洗柱，收集并保存穿透液（含杂蛋白）。
12.用 0.2-1 mL GST 洗脱液洗柱，收集并保存穿透液（含 GST 标记蛋白）。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在 4℃放置，需立即用于后续处理（如浓度测定或 SDS-PAGE 电泳）或-80℃长期放置。
13.对收集的 2 种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或 SDS-PAGE 分析。注意：如果不预先脱盐，则只能用 Bradford 法或 OD 检测法（1 OD280 约等于 0.5 mg/mL 蛋白）测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于 GST 的分子量为 26 KD，所以在 SDS-PAGE 胶上，GST 标记蛋白将比天然蛋白大 26 KD。
原理及特点:
重组蛋白 N 端的 GST 谷胱甘肽 S 转移酶（Glutathione S Transferase）能提高重组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用 GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合，并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立，是目前分离纯化 GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的，具有下列
小鼠抗 Flag 标签单抗100μL特点：
1. 一站式套装，含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达 GST 标记蛋白的细菌（酵母、杆状病毒、培养细胞）即可，非常方便。
2. 专一性强，一次过柱即可获得纯度高达 95%的 GST-标记蛋白。
3. 只能在非变性条件下使用，只可用于纯化没形成包涵体的 GST 标记蛋白。
4. 每次可以处理 20 mL 的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5. 提供 4 mL 浓度为 50%的谷胱甘肽-Agarose 介质，可吸附 5-10 mgGST 标记蛋白质。
6. 本介质可以反复使用多次。
一:重组蛋白的表达和细菌收集
1. 37℃振荡培养 20 mL 含表达质粒的细菌到 OD600=0.6-0.8。
2. 加 IPTG 到终浓度为 0.1 mM，30℃振荡培养 3 小时或 22℃振荡培养 8小时（或过夜）。
3. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清。
4. 用 1×PBS 缓冲液重悬细菌沉淀，4℃ 5000 g 离心 10 分钟，弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。
去氧胆酸盐枸椽酸盐乳糖蔗糖琼脂用于致病性肠杆菌的分离培养
去氧胆酸盐枸椽酸盐琼脂用于细菌总数的测定和分离培养
胰胨大豆胨固绿琼脂用于滤膜细菌总数的测定和分离培养(NEOGEN方法)
LES Endo 琼脂用于滤膜细菌计数(Merck方法)
m-TGE 肉汤用于奶制品中滤膜细菌计数(Acumedia方法)
m-TEC琼脂用于水中耐热细菌滤膜计数(Acumedia方法)
现隐肉汤用于水中大肠菌群计数(US-EPA方法)
醋酸盐琼脂用于细菌醋酸盐试验
水平板计数琼脂培养基用于饲料中细菌总数测定
R2A 琼脂用于饮用水中异生细菌分离培养(ACUMEDIA方法)
心浸液琼脂用于培养营养要求高的微生物 (ACUMEDIA方法)
桔汁琼脂用于饮料中耐酸细菌的分离培养(ACUMEDIA方法)
CATC琼脂用于食品和饮料肠球菌的分离培养(MERCK方法)
EEM培养基用于致病性的增菌培养和肠杆菌的增菌培养(Japan方法)
胰蛋白胨胆盐琼脂用于的膜过滤法选择性培养(ISO标准)
胆盐七叶苷琼脂250用于肠球菌和肠道致病菌的分离培养(Acumedia方法)
VRBG 琼脂250用于奶粉中坂崎杆菌的分离培养(FDA方法)
TSA 琼脂250用于奶粉中坂崎杆菌的纯化培养(FDA方法)
胰蛋白胨大豆肉汤 250用于球菌的MPN测定，增菌培养，NaCl浓度可根据需要而调整（GB、SN标准）
Baird-Parker琼脂基础 250用于球菌的选择性分离培养（GB、SN标准）
亚碲酸盐卵黄增菌液 5ml*10加入Baird-Parker琼脂基础中
兔血浆 0.5ml*20用于球菌凝固酶试验
DNA酶琼脂 100用于核糖核酸酶检测
7.5%氯化钠肉汤 250用于球菌的增菌培养（GB标准）
肠毒素产毒培养基250用于球菌肠毒素产毒试验
亚碲酸钠肉汤培养基基础 250用于球菌的增菌培养。每100ml培养基需另加入1%亚碲酸钠1ml
葡萄球菌增菌肉汤 250用于凝固酶阳性葡萄球菌的选择性增菌
葡萄球菌选择性琼脂 250用于凝固酶阳性葡萄球菌的选择性分离培养
北沙参亚碲酸钠胨水培养基基础250用于球菌的增菌培养。每100ml培养基需另加入1%亚碲酸钠0.2ml
葡萄球菌选择性琼脂110(CHAPMAN 琼脂)250用于球菌的分离培养
甘露醇卵黄培养基基础250用于球菌的分离培养(Japan方法)
V-J琼脂250病源标本和其它标本中甘露醇阳性球菌的选择性分离(Merck方法)
改良Giolitti-Cantobi 肉汤250用于球菌的增菌培养
TMP琼脂培养基250用于球菌的分离培养
缓冲蛋白胨水（BPW） 250用于沙门氏菌前增菌培养，亦可用于李氏菌前增菌培养（GB、SN标准）
四硫磺酸盐煌绿增菌液基础(TTB)250用于沙门氏菌选择性增菌培养，需加入煌绿和碘液（GB、SN标准）
胆硫乳琼脂（DHL） 250肠道菌选择性培养基，特别是沙门氏菌的选择性分离（GB、SN标准）
三糖铁琼脂（TSI） 250生化培养基，用于肠杆菌科细菌的生化反应筛选（GB、SN标准）
SS 琼脂 250用于沙门氏菌，志贺氏菌的选择性分离培养（GB标准）
亚利桑那菌琼脂（SA） 100用于亚利桑那沙门氏菌的选择性分离（SN标准）
氯化镁孔雀绿肉汤（MM，RV Medium） 250用于沙门氏菌的选择性增菌培养（GB标准）
HE 琼脂（HE） 250用于沙门氏菌的选择性分离培养(FDA标准)
小鼠抗 Flag 标签单抗100μL赖氨酸脱羧酶培养基 5生化培养基，赖氨酸脱羧酶试验（GB、SN标准）
尿素酶琼脂基础 250生化培养基，用于细菌脲酶检测（GB、SN标准）
40%尿素水 5ml*10加入尿素酶琼脂基础
V-P 半固体琼脂 250生化培养基，用于细菌V-P试验（SN标准）
吲哚培养基 10生化培养基，用于细菌靛基质试验，亦称色氨酸肉汤（SN标准）
Kovacs氏靛基质试剂盒10ml*1吲哚（靛基质）试验配套试剂
丙二酸钠培养基 10生化培养基，用于细菌丙二酸盐利用试验（GB、SN标准）
卫矛醇半固体琼脂 10生化培养基，用于细菌卫予醇发酵试验（SN标准）
GN 增菌液 250主要用于志贺氏菌的增菌培养，亦可用于沙门氏菌增菌培养（GB标准）
