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一站式 MBP 标签蛋白纯化套装20 次
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价格：￥电议
更新日期：2026/8/7 17:04:43
生 产 地：中国大陆
产品型号：
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详细内容
一站式 MBP 标签蛋白纯化套装20 次二：细胞裂解
5. 如果用本产品 A 型，用 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（1 mL 1×PBS 缓冲液+50 uL 溶液 A+ 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液）重悬细菌沉淀，冰上超声裂解菌体直到在显微镜下看见绝大多数细胞破裂。超声参数需根据仪器型号自行摸索，一般选 1K-10K 频率处理 15 次，每次20 秒，间隔 1 分钟（必需放置在冰上）。裂解物不能粘稠，否则会堵塞
层析柱。
6. 如果用本产品 B 型，在 1 mL 冰浴的新鲜配制的细胞裂解液（在 20 mL1×PBS 缓冲液中加入所有 30 mg 溶菌酶干粉，溶解后分装成 1 mL/管，取一管使用，剩余的-20℃放置）中加入 25 uL 10 mg/mL 的 PMSF 溶液和 1 uL Benzonase，用此混合液重悬细菌沉淀后冰上放置 30 分钟，得到细菌裂解物。
7. 将超声或酶法细胞裂解物在 13000 g 4℃离心 10 分钟去除未裂解细胞和裂解细胞碎片以防堵柱，所得上清即含可溶性 GST 标记蛋白。
一站式 MBP 标签蛋白纯化套装20 次三：层析柱的制备和 GST 蛋白纯化
8. 摇晃将谷胱甘肽-Agarose 介质充分混匀后，取适量加入到预放了一片筛板的层析柱中（介质用量需要根据 GST 蛋白产量决定，100 mL 菌液一般使用 200 uL 介质即可）。下列步骤各溶液的用量均针对 200 uL 介质而定，如果介质用量不同，各溶液用量需相应调整。
9. 用 5 mL 预冷的 1×PBS 缓冲液洗柱。
10.将第 7 步得到的上清液（含可溶性 GST 标记蛋白）上柱，让重力使上柱液自然流出，收集并保存穿透液用于 SDS-PAGE 电泳。GST 和谷胱甘肽之间的结合很缓慢，所以流速一定不能快，否则结合不充分。流速一般在 0.2-1 mL/分钟即可。如要提高 GST 标记蛋白与介质的结合效率，可用本试剂盒提供的红盖将层析柱下的漏液口堵上，让细菌裂解液和介质在4℃结合 30 分钟或过夜。也可以将穿透液反复上柱。
11.用 0.5-2 mL 1×PBS 缓冲液洗柱，收集并保存穿透液（含杂蛋白）。
12.用 0.2-1 mL GST 洗脱液洗柱，收集并保存穿透液（含 GST 标记蛋白）。由于可能含蛋白酶污染，所以穿透液不能在 4℃放置，需立即用于后续处理（如浓度测定或 SDS-PAGE 电泳）或-80℃长期放置。
13.对收集的 2 种穿透液和洗脱液进行蛋白定量或 SDS-PAGE 分析。注意：如果不预先脱盐，则只能用 Bradford 法或 OD 检测法（1 OD280 约等于 0.5 mg/mL 蛋白）测定穿透液和洗脱液的蛋白浓度。由于 GST 的分子量为 26 KD，所以在 SDS-PAGE 胶上，GST 标记蛋白将比天然蛋白大 26 KD。
原理及特点:
重组蛋白 N 端的 GST 谷胱甘肽 S 转移酶（Glutathione S Transferase）能提高重组蛋白的水溶性，所以常用于蛋白质重组表达。GST-谷胱甘肽亲和层析是利用 GST 标记的蛋白能与谷胱甘肽层析介质结合，并能被还原型谷胱甘肽洗脱的特点而建立，是目前分离纯化 GST 标记蛋白质的重要方法。本产品就是专门用于上述目的，具有下列
特点：
1. 一站式套装，含所需的谷胱甘肽介质、溶液和层析柱，用户只需要提供表达 GST 标记蛋白的细菌（酵母、杆状病毒、培养细胞）即可，非常方便。
2. 专一性强，一次过柱即可获得纯度高达 95%的 GST-标记蛋白。
3. 只能在非变性条件下使用，只可用于纯化没形成包涵体的 GST 标记蛋白。
4. 每次可以处理 20 mL 的表达菌液，适合初步筛选和鉴定。
5. 提供 4 mL 浓度为 50%的谷胱甘肽-Agarose 介质，可吸附 5-10 mgGST 标记蛋白质。
6. 本介质可以反复使用多次。
一:重组蛋白的表达和细菌收集
1. 37℃振荡培养 20 mL 含表达质粒的细菌到 OD600=0.6-0.8。
2. 加 IPTG 到终浓度为 0.1 mM，30℃振荡培养 3 小时或 22℃振荡培养 8小时（或过夜）。
3. 4℃ 5000 g 离心 10 分钟收集 20 mL 表达菌液，弃上清。
4. 用 1×PBS 缓冲液重悬细菌沉淀，4℃ 5000 g 离心 10 分钟，弃上清。沉淀可直接用于裂解或放-80℃保存。
SCHAEDLER 琼脂250用于厌氧菌的分离培养(Acumedia 方法)
WILKINS-CHALGREN琼脂250用于厌氧菌的分离培养(Acumedia 方法)
MCP琼脂250用于产气荚膜梭菌的计数和培养(Acumedia 方法)
厌氧菌琼脂250用于厌氧菌分离培养
CDC厌氧菌琼脂250用于厌氧菌分离培养(Acumedia 方法)
溶血性链球菌
葡萄糖肉浸液肉汤 250用于溶血性链球菌的增菌培养（GB标准）
匹克 匹克氏肉汤基础A 100用于溶血性链球菌的增菌培养 （GB标准）
肉浸液肉汤培养基 250用于溶血性链球菌、蜡样芽孢杆菌和球菌的增菌培养（GB标准）
叠氮钠葡萄糖肉汤 250用于链球菌的增菌培养
KF链球菌琼脂 100用于链球菌的选择性分离及计数（SN标准）
LIM培养基250用于链球菌的分离培养(Japan方法)
BETA-SSA 琼脂250用于链球菌的选择性分离培养(ACUMEDIA方法)
一站式 MBP 标签蛋白纯化套装20 次改良Y培养基 250用于分离小肠结肠炎耶尔森氏菌 （GB标准）
改良磷酸盐缓冲液PSB 250用于小肠结肠炎耶尔森氏菌冷增菌培养 （GB标准）
ITC 肉汤250用于分离培养耶尔森氏菌(ISO方法)
CIN-1I培养基基础 250用于分离小肠结肠炎耶尔森氏菌 （GB标准）
消毒灭菌效果评价
营养肉汤（NB）250一般细菌培养,转种,复壮,增菌等.也可用于消毒效果测定
营养琼脂（NA）250细菌计数(GB标准),不含糖,可作血琼脂基础,传代用.也可用于消毒效果测定
普通肉汤培养基 250用于球菌的增菌培养 (SN、GB标准)，也可用于消毒效果测定
一次性卫生用品检验
0.5%葡萄糖肉汤培养基 250用于环氧乙烷消毒和电离辐射消毒过程监测指示菌（枯草杆菌黑色变种芽孢及短小杆菌芽孢）的培养（GB标准）
溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基 250用于压力蒸气消毒过程监测指示菌（嗜热脂肪杆菌芽孢）的培养及消毒效果测定
液体沙氏培养基 250用于真菌、酵母菌增菌
沙氏琼脂培养基 250用于卫生用品的真菌检测
匹克氏肉汤基础B 250用于一次性使用卫生用品中溶血性链球菌的检验
乳酸菌、双歧杆菌检验
改良番茄汁培养基 250
改良MC培养基 250
LBS 琼脂
M17琼脂250用于牛奶和乳制品中乳酸菌检测和分离培养(Merck方法)
M17肉汤250用于牛奶和乳制品中乳酸菌检测和分离培养(Merck方法)
乳酸杆菌选择性琼脂250用于乳酸菌检测和分离培养(ACUMEDIA)
APT 琼脂250用于乳酸菌分离培养
双歧杆菌BS培养基250用于双歧杆菌分离培养
BL琼脂培养基250用于双歧杆菌分离培养(GB标准)
BBL琼脂培养基250用于双歧杆菌分离培养(GB标准)
TPY琼脂培养基250用于双歧杆菌分离培养(GB标准)
PYG 液体培养基基础250用于双歧杆菌增菌培养，使用时需加入氯化血红素和维生素K1(GB标准)
胰酪胨大豆酵母浸膏肉汤(TSB-YE) 250用于单增李氏菌增菌培养（SN、GB标准）
胰酪胨大豆酵母浸膏琼脂(TSA-YE) 250用于单增李氏菌的分纯，培养，可用于做7%羊血琼脂（SN标准）
李氏菌选择性培养基基础(MMA) 250用于单增李氏菌选择性分离
复达欣 3mg/支*5每支添加于 100ml HB4155
糖发酵基础肉汤 250适用于微生物检验中各种糖发酵实验，无菌加入各种糖醇类物质（SN标准）
李氏菌增菌肉汤(LB1,LB2)基础 250添加奈啶酮酸，吖啶黄素，即为LB1，LB2，用于李氏菌二步增菌（GB标准）
萘啶酮酸4.5mg*5添加于225ml HB4160中制成LB1
吖啶黄素2.7mg*5添加于225ml HB4160中制成LB1
七叶苷培养基 10生化试验培养基，用于细菌七叶苷利用试验（SN标准）
半固体动力培养基 250用于动力观察，菌种保存，H抗原位相变异试验等（SN标准）
牛津琼脂(OXA)基础 250用于单增李氏菌的选择性分离
