人抗血小板抗体 IgG（ PA-IgG）ELISA检测试剂盒免费代测

试剂盒组成 48 孔配置 96 孔配置 保存

说明书 1 份 1 份

封板膜 2 片（ 48 ） 2 片（ 96 ）

密封袋 1 个 1 个

酶标包被板 1 × 48 1 × 96 2-8 ℃ 保存

阴性对照 0.5ml × 1 瓶 0.5ml × 1 瓶 2-8 ℃ 保存

阳性对照 0.5ml × 1 瓶 0.5ml × 1 瓶 2-8 ℃ 保存

酶标试剂 3 ml × 1 瓶 6 ml × 1 瓶 2-8 ℃ 保存

样品稀释液 3 ml × 1 瓶 6 ml × 1 瓶 2-8 ℃ 保存

显色剂 A 液 3 ml × 1 瓶 6 ml × 1 瓶 2-8 ℃ 保存

显色剂 B 液 3 ml × 1 瓶 6 ml × 1 瓶 2-8 ℃ 保存

终止液 3ml × 1 瓶 6ml × 1 瓶 2-8 ℃ 保存

浓缩洗涤液 （ 20ml × 20 倍） × 1 瓶 （ 20ml × 30 倍） × 1 瓶 2-8 ℃ 保存

样本处理及要求 ：

1. 血清 ： 室温血液自然凝固 10-20 分钟 ， 离心 20 分钟左右 （ 2000-3000 转 / 分 ） 。 仔细收集上

清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择 EDTA 或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，离 心

20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分 ） 。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次

离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分 ） 。仔细收集上清，保存过程

中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清 ： 检测分泌性的成份时 ， 用无菌管收集 。 离心 20 分钟左右 （ 2000-3000 转 /

分 ） 。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS （ PH7.2-7.4 ）稀释细胞悬液，细胞

浓度达到 100 万 /ml 左右 。 通过反复冻融 ， 以使细胞破坏并放出细胞内成份 。 离心 20 分2

钟左右（ 2000-3000 转 / 分 ） 。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本 ： 切割标本后 ， 称取重量 。 加入一定量的 PBS ， PH7.4 。 用液氮迅速冷冻保存备

用。标本融化后仍然保持 2-8 ℃ 的温度。加入一定量的 PBS （ PH7.4 ） ，用手工或匀浆器

将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右（ 2000-3000 转 / 分 ） 。仔细收集上清。分装后一份待

检测，其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上

进行试验，可 将标本放于 -20 ℃ 保存，但 应 避免反复冻融 .

7. 不能检测含 NaN3 的样品 ，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（ HRP ）活性。

 人抗血小板抗体 IgG（ PA-IgG）ELISA检测试剂盒操作步骤 ：

1. 编号 ： 将样品对应微孔按序编号 ， 每板应设阴性对照 2 孔 、 阳性对照 2 孔 、 空白对照 1

孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）

2. 加样：分别在阴、阳性对照孔中加入阴性对照、阳性对照 50 μ l 。然后在 待测样品孔 先

加样品稀释液 40 μ l ，然后再加待测样品 10 μ l 。 加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不

触及孔壁， 轻轻 晃动 混匀，

3. 温育：用封板膜封板后置 37 ℃ 温育 3 0 分钟 。

4. 配液：将 30 （ 48T 的 20 倍）倍浓缩洗涤液加蒸馏水至 600ml 后备用

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体， 甩干 ，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此

重复 5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50 μ l ，空白孔除外 。

7. 温育：操作同 3 。

8. 洗涤：操作同 5 。

9. 显色 ： 每孔先加入显色剂 A 50 μ l ， 再加入显色剂 B 50 μ l ， 轻轻震荡混匀 ， 37 ℃ 避光显 色

15 分钟

10. 终止：每孔加终止 液 50 μ l ，终止反应 （此时蓝色立转黄色 ） 。

11. 测定 ： 以空白空调零 ， 4 50 nm 波长依序测量各孔的 吸光 度 （ OD 值 ） 。 测定应在加终止

液后 15 分钟以内进行。

结果判定：

试验有效性：阳性对照孔平均值 ≥ 1.00; 阴性对照平均值 ≤ 0.10

临界值（ CUT OFF ）计算：临界值 = 阴性对照孔平均值 +0.15

阴性判定：样品 OD 值 < 临界值（ CUT OFF ）者为 人 PA-IgG 阴性

阳性判定：样品 OD 值 ≥ 临界值（ CUT OFF ）者为 人 PA-IgG 阳性

注意事项

1 ．操作严格按照说明书进行，本试剂不同批号组分不得混用。

2 ．试剂盒从冷藏环境中取出应在室温平衡 15-30 分钟后方可使用，酶标包被板开封后如未

用完，板条应装入密封袋中保存。

3 ． 浓洗涤液 可能 会有 结晶 析出，稀释时可在水浴中加温助溶 ，洗涤时不影响结果。

4 ． 封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5 ．底物请避光保存。

6 ．试验结果判定必须以酶标仪读数为准，使用双波长检测时，参考波长为 630nm

7 ．所有样品，洗涤液和各种废弃物都应按传染物处理。终止液为 2M 的硫酸，使用时必须注意安全。

 人抗血小板抗体 IgG（ PA-IgG）ELISA检测试剂盒保存条件及有效期

1 ． 试剂盒保存 ： ； 2-8 ℃ 。

2 ．有效期： 6 个月4