鸭ELISA试剂盒的两大实验操作过程

 

 

需要自备的器材；微量移液器，微量移液器配套使用的枪头，用来稀释洗涤液的500ml量筒，适用于检测96T微孔板的酶标仪，用于稀释样品的1.5ml Ep管，蒸馏水或去离子水。 样品的制备；用样品稀释液将待检血清样品进行100倍稀释（建议：2μl血清样品加入198μl样品稀释液中），样品加入包被板前要充分混匀，稀释不同待检样品注意更换枪头。注意：①制备血清用的血液样本应无溶血现象发生；②不能稀释阴性、阳性对照。

操作步骤；在A1和A2孔中分别加入100μl阴性对照；在A3和A4孔中分别加入100μl阳性对照；取100μl经1：100稀释好的待检样品加入相应孔中，并做好记录；37℃孵育1h；将各孔的液体弃入废液桶，每孔加250μl的洗涤液（试剂盒内20×浓缩洗涤液需用蒸馏水或去离子水稀释后方可使用。如有结晶，需先溶解后，方可进行稀释）进行洗板，重复5次，每次30s；加液时防止各孔间洗涤液串流影响检测结果，尽量将孔内洗涤液抛甩干净；每孔加100μl酶标结合物；37℃孵育1h；重复步骤3.5；每孔加100μl底物液；37℃孵育10min（避光显色）；每孔加100μl的终止液；立刻于450nm波长处测定各孔的吸光度值，即OD450值。

 

 

试验有效性判断；阴性对照：正常情况下，阴性对照孔OD450值≤0.2；阳性对照：正常情况下，阳性对照孔OD450值≥0.4；临界值(C.O.)计算：临界值=0.2+阴性对照均值；阴性对照OD450值大于0.2时应舍弃，如所有阴性对照OD450值均大于0.2时须重复实验；阴性对照低于0.05时以0.05计算。