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如何对细胞组进行分级分离
点击次数：234 发布时间：2017/8/24 10:00:44
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吴*
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如何对细胞进行分级分离取决于很多因素，包括哪些仪器、知识可以利用，您想要分离什么，以及这些组分的下游应用是什么。
离心是细胞分级分离中最常用的技术之一，它们单独使用，或与其他方法结合。例如，对于高尔基体或过氧化物酶体，大部分操作都要求高速的密度梯度离心。然而，O’Hara Noonan也指出，超速离心也有一些缺点，包括超速离心机是高价的仪器，有些实验室无法接触到。另外，密度梯度难以倾倒是出了名的，其结果是技术依赖的。
当然，其他的许多组分也可以只利用试剂和台式仪器来富集。供应商开发出一些试剂盒，能方便快捷地带来高度富集的细胞组分。赛默飞世尔全新设计的Mem-PER Plus试剂盒，能在一小时之内富集完整的膜相关蛋白。
据sigma-aldrich的产品专家Michael Moehlenbrock介绍，这类试剂盒的原理在很大程度上是类似的。它们往往使用低渗缓冲液给细胞膜带来压力，然后用等渗的提取缓冲液(带或不带还原剂和蛋白酶抑制剂)来维持感兴趣的细胞器。有时也需要机械裂解或去污剂裂解。“各个不同供应商在细胞分级分离试剂盒的设计上都是一致的，而不同细胞组分的差异在于缓冲液组成、裂解试剂和离心速度，”Moehlenbrock说。
此类试剂盒的价值并不在于某些秘密试剂，而在于QC系统的一致性和重复性。“细胞分级分离的方法已经过充分鉴定，其操作步骤适用于大部分应用，”Moehlenbrock说。“商业化试剂盒为最终用户带来了简便和效率，同时提供了品质保证的安全性。”
通过改变穿插在离心步骤之间的缓冲液的去污剂组分，研究人员可分离不止一个组分。例如，市场上许多试剂盒可收集细胞核和胞浆蛋白。其他试剂盒也带来了三个或四个不同的组分。Cell Signaling Technology的Cell Fractionation Kit产生了细胞质、细胞膜/细胞器以及细胞核/细胞骨架组分，而QIAGEN的Qproteome Cell Compartment Kit分离出细胞质、细胞膜、细胞核和细胞骨架组分。
美天旎提供一种不含去污剂的试剂盒，它利用TOM22抗体标记的磁珠来特异分离线粒体。据该公司的技术支持介绍，他们不提供其他亚细胞组分的产品，但客户可以利用自己的抗体来间接分离其他组分。
同样地，赛默飞世尔的Cell Surface Protein Isolation Kit标记细胞表面蛋白的外部赖氨酸，它具有一个可切割的生物素衍生物，让此蛋白组分在细胞裂解后可被捕获。
(S)-(-)-DBD-Pro-COCl [=(S)-(-)-4-(N,N-二甲氨基磺酰基)-7-(2-氯甲酰四氢吡咯-1-基)-2,1,3-苯并恶二唑](>90.0%(HPLC))英文名称：(S)-(-)-DBD-Pro-COCl [=(S)-(-)-4-(N,N-Dimethylaminosulfonyl)-7-(2-chloroformylpyrrolidin-1-yl)-2,1,3-benzoxadiazole] 质量规格：>90.0%(HPLC)CAS号：150993-63-8
(S)-(-)-N-(5-硝基-2-吡啶基)丙氨醇(>98.0%(T))英文名称：(S)-(-)-N-(5-Nitro-2-pyridyl)alaninol质量规格：>98.0%(T)CAS号：115416-52-9
(S)-(-)-N-(5-硝基-2-吡啶基)脯氨醇(>99.0%(T))英文名称：(S)-(-)-N-(5-Nitro-2-pyridyl)prolinol质量规格：>99.0%(T)CAS号：88374-37-2
(S)-(-)-NBD-Pro-COCl [=(S)-(-)-4-硝基-7-(2-氯甲酰四氢吡咯-1-基)-2,1,3-苯并恶二唑]英文名称：(S)-(-)-NBD-Pro-COCl [=(S)-(-)-4-Nitro-7-(2-chloroformylpyrrolidin-1-yl)-2,1,3-benzoxadiazole] 质量规格：用于旋光纯度测定的高效液相色谱标记试剂CAS号：159717-68-7
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