免疫组化之sp基本操作方法

免疫组化之sp基本操作方法

1、烤片，68℃，20分钟，

2、elisa试剂盒常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水;二甲苯I20min⇒二甲苯II20min⇒100%酒精10min⇒100%酒精10min⇒95%酒精5min⇒80%酒精5min⇒70%酒精5min

3、阻断灭活内源性过氧化物酶：3%H2O237℃孵育10min，PBS冲洗3X5min;

4、抗原修复：置0.01M枸橼酸缓冲液(PH6.0)中用煮沸(95℃，15-20min)，elisa试剂盒自然冷却20min以上，再用冷水冲洗缸子，加快冷却至室温，PBS冲洗3X5min。

5、正常羊血清工作液封闭，37℃10min，倾去勿洗。

6、滴加一抗4℃冰箱孵育过夜，PBS冲洗3X5min(用pbs缓冲液代替一抗作阴性对照);

滴加生物素标记二抗，37℃孵育30min，PBS冲洗3X5min;

7、滴加辣根过氧化物酶标记的链霉素卵白素工作液，37℃孵育30min，PBS冲洗3X5min;

8、DAB/H2O2反应染色，自来水充分冲洗后，

苏木素复染，elisa试剂盒常规脱水，透明，干燥，封片。

原创作者：上海谷研生物科技有限公司