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分析国产ELISA试剂盒操作流程

点击次数:234 发布时间:2017/5/18 15:08:43
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吴*
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国产elisa试剂盒可概括四个方面:
1、免疫酶染色各种细胞内成份的定位。
2、研讨抗酶抗体的合成。
3、闪现微量的免疫沉淀反响。
4、定量检查体液中抗原或抗体成份。
国产ELISA试剂盒操作流程如下:
(1)待测样品孔中每孔参加待测样品100μl,每种样品设3个平行孔;设两个阴性对照孔,每孔加未处理组的细胞裂解液100μl;另设一个空白对照孔,参加纯细胞裂解液100μl。
(2)酶标板置4℃,包被过夜。
(3)洗板:吸干孔内反响液,用洗刷液过洗一遍(将洗刷液注满板孔后,即甩去),以后将洗刷液注满板孔,浸泡1-2分钟,间歇摇摆。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗刷3-4次。
(4)阴性对照孔每孔参加PBS 50μl,样品孔及空白孔每孔参加1:500稀释的兔抗人AIF抗体工作液50μl。
(5)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(6)洗板,同(4)。
(7)每孔加1:5000稀释的HRP-符号的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
(8)酶标板置37℃培养箱的湿盒内,孵育60min。
(9)洗板,同(4)。
(10)每孔加TMB显色液 100μl,ELISA试剂盒悄悄混匀10s,置37℃暗处反响15-20min。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4停止反响。
(12)别离测450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2,终究测得的OD值为两者之差(W1-W2),以减少由容器上的划痕或指印等形成的光搅扰。
(13)数据处理:在得出标本(S)和阴性对照(N)的 OD值后,核算S/N值。S/N≥2.1为阳性断定规范。

原创作者:上海谷研生物科技有限公司

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