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PPAR凝胶迁移突变探针(1.75μM)多少钱
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价格：￥550
更新日期：2026/5/25 18:53:40
生 产 地：中国大陆
产品型号：YT246
商家名片
王*
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相关标签：YT246,PPAR凝胶迁移突变探针(1.75μM),PPAR,Mutation,Probe,For,EMSA(1.75μM),1.75ΜM
详细内容
名称：PPAR凝胶迁移突变探针(1.75μM)多少钱
产地：国产|进口
英文名：PPAR Mutation Probe For EMSA(1.75μM)
编号：YT246
品牌：百奥莱博
规格：60μl
本探针是用于EMSA(也称gel shift)研究的PPAR consensus oligonucleotide的突变体。可以作为EMSA探针－PPAR的阴性对照，用于EMSA结合反应中突变探针的冷竞争反应等。这里所指的PPAR包括PPARα、PPARβ和PPARγ。一个包装的突变探针，如果用于同位素标记EMSA探针的突变探针冷竞争反应，可以进行30-60个突变探针的冷竞争反应。
PPAR consensus oligo的序列如下：
5＇-CAA AAC TAG GTC AAA GGT CA-3＇
3＇-GTT TTG ATC CAG TTT CCA GT-5＇
EMSA突变探针－PPAR中PPAR的公认的结合位点发生了突变，从而使PPAR无法和该突变探针结合。在探针冷竞争反应中，正常的标记探针和PPAR的结合的条带会被抑制；而在突变探针冷竞争反应(cold competition)中，正常的标记探针和PPAR的结合的条带不会被抑制。参考下图。
一个典型的EMSA/Gel- Shift分析图
1,阴性对照反应(标记探针)；
2,常规反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针)；
3,探针冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋标记探针100倍量的未标记探针)；
4,突变探针的冷竞争反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋标记探针100倍量的未标记突变探针)；
5,Super-shift反应(含激活的目的转录因子的核蛋白＋标记探针＋目的转录因子的特异抗体)。
注意事项：
1. 避免加热到40℃以上，温度过高会导致双链DNA探针解聚成单链。而单链无法用于EMSA研究。
2. 对于EMSA的详细操作可以参考我们的EMSA试剂盒的使用说明。
储存条件：-20℃，有效期一年。.jpg)
关于PPAR凝胶迁移突变探针(1.75μM)多少钱的更详细说明，请致电我公司咨询，我们将以最饱满的热情为您提供解答，此外，我公司专业供应下列产品：
·小鼠抗GST抗体
编号：YT722
英文名称：GST Mouse Monoclonal Antibody
规格：50μl
本品为来源于兔的抗GST的多克隆抗体。
宿主：小鼠
克隆性：单克隆抗体
用途：WB,ELISA
分子量：26KDa
推荐稀释比例：WB(1:1000),ELISA(1:2000-1:4000)
| About this Antibody | |
| Name | GST Mouse Monoclonal Antibody |
| Category | Monoclonal antibody(mAb); Primary antibody |
| Isotype | IgG |
| Purification | ProA affinity purified |
| About the Immunogen | |
| Immunogen | This antibody is produced by immunizing mice with GST protein. |
| Gene ID | - |
| SwissProt | - |
| Synonyms | - |
| Category | Related Products |
| Background | The glutathione S-transferase (GST) family of enzymes comprises a long list of cytosolic, mitochondrial, ａnd microsomal proteins that are capable of multiple reactions with a multitude of substrates, both endogenous ａnd xenobiotic. Mammalian cytosolic GSTs are dimeric both subunits being from the same class of GSTs. The monomers are in the range of 22–29 kDa. Glutathione S-transferase is used to create the "GST gene fusion system" in genetic engineering. Here, GST is used to purify ａnd detect proteins of interest. |
注意事项：
1. 如果本抗体用于Western blot (WB)、免疫荧光(IF)、免疫细胞化学(ICC)等实验，请注意回收使用过的稀释抗体。回收的抗体通常至少可以重复使用5-10次。稀释后的抗体，包括已经使用过的稀释抗体，请4℃保存。
2. 回收后重复使用的抗体，使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象，可以10,000g离心1-3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。
3. 提供的Western一抗稀释液也可以用于免疫荧光(IF)、免疫组化(IHC)、免疫细胞化学(ICC)等适当用途。如果希望获得最佳的检测效果，请考虑使用上述检测专用的一抗稀释液。
储存条件：-20℃，有效期一年。
PPAR凝胶迁移突变探针(1.75μM)多少钱关键词：PPAR Mutation Probe For EMSA(1.75μM),YT246,PPAR凝胶迁移突变探针(1.75μM),1.75ΜM
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·小鼠抗AU1标签抗体
编号：YT681
英文名称：AU1-tag Mouse Monoclonal Antibody
规格：50μl
本品为来源于小鼠的抗AU1标签的单克隆抗体
宿主：小鼠
用途：WB,ELISA,IP,ICC, IF
推荐稀释比例：WB(1:1000)
克隆性：单克隆抗体
| About this Antibody | |
| Name | AU1-tag Mouse Monoclonal Antibody |
| Category | Monoclonal antibody(mAb); Primary antibody |
| Isotype | IgG2a |
| Purification | ProL affinity purified |
| About the Immunogen | |
| Immunogen | This antibody is produced by immunizing mice with a synthetic peptide DTYRYI (KLH-coupled). |
| Gene ID | - |
| SwissProt | - |
| Synonyms | - |
| Category | Related Products |
| Background | The recognized AU1 sequence represents the amino acid sequence DTYRYI, derived from the major capsid protein of bovine papillomavirus-1 (BPV-1). AU1 is a commonly used epitope tag engineered onto the N- or C- terminus of a protein of interest so that the tagged protein can be analyzed ａnd visualized by immunochemical methods. This antibody recognizes the AU1-tag fused to the carboxyl terminus of targeted proteins. |
注意事项：
1. 如果本抗体用于Western blot (WB)、免疫荧光(IF)、免疫细胞化学(ICC)等实验，请注意回收使用过的稀释抗体。回收的抗体通常至少可以重复使用5-10次。稀释后的抗体，包括已经使用过的稀释抗体，请4℃保存。
2. 回收后重复使用的抗体，使用方法同新鲜稀释的抗体。如果在重复使用过程中发现抗体出现轻微混浊现象，可以10,000g离心1-3分钟，取上清用于后续检测。如果回收的抗体出现明显的絮状物或长霉长菌等情况，则可以考虑废弃该抗体。
3. 提供的Western一抗稀释液也可以用于免疫荧光(IF)、免疫组化(IHC)、免疫细胞化学(ICC)等适当用途。如果希望获得最佳的检测效果，请考虑使用上述检测专用的一抗稀释液。
储存条件：-20℃，有效期一年。
PPAR凝胶迁移突变探针(1.75μM)多少钱关键词：PPAR Mutation Probe For EMSA(1.75μM),YT246,PPAR凝胶迁移突变探针(1.75μM),1.75ΜM
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·基因定点突变试剂盒
编号：YT027
英文名称：Site-directed Gene Mutagenesis Kit
规格：10次
本试剂盒可以用于点突变，多个邻近密码子的突变，单个或多个邻近密码子的缺失(deletion)或插入(insertion)。
本试剂盒是一个利用目前最新的基因点突变技术设计而成的试剂盒。只需通过基于PCR的突变质粒的合成，和基于Dpn I的模板质粒的消化，转化培养以及后续的酶切或测序鉴定，即可得到预期的突变质粒(参考图1)。累计操作时间不足2小时即可完成基因的定点突变。
参考上图，使用本试剂盒时需要先设计长度通常为30个碱基以上的互补的两个引物，在引物中含有预期的突变位点。然后以待突变的质粒为模板，用这两个引物进行PCR扩增反应。这样可以产生含有预期的突变位点的双链质粒，但这个双链质粒中有两个nick位点。待突变的质粒通常来源于大肠杆菌等细菌，在细菌中会被甲基化修饰，而在体外通过PCR扩增得到的质粒不会被甲基化。这样用甲基化酶Dpn I处理，可以消化掉待突变的质粒模板，而使通过PCR扩增出来的含有突变位点的质粒被选择性地保留下来。这样把Dpn I处理过的产物转化细菌后，质粒中有两个nick位点可以被大肠杆菌修复，得到的克隆就会含有预期的突变质粒了。
本试剂盒提供了DH5α甘油菌，可用于感受态细菌的制备。
试剂盒组份：
| Pfu DNA Polymerase | 10μl |
| Reaction Buffer(10X) | 100μl |
| dNTP Mix(2.5mM each) | 50μl |
| Dpn I | 10μl |
| DH5α 甘油菌 | 200μl |
| Nuclease-Free Water | 1ml |
储存条件：-20℃，有效期一年。
使用说明：
1. 引物设计：
用于特定基因突变的引物需要单独设计，请参考如下一些基本原则进行设计：
(1) 共需设计两条互补的引物。可以先集中设计一条，然后就可以得到互补的另一条引物。
(2) 引物的长度通常为25-45个碱基。
(3) 引物中突变位点任何一侧都必需满足 4X(GC碱基数)＋2X(AT碱基数) ≥45。但引物也不宜过长，否则通常会形成非常稳定的二级结构。通常把突变位点两侧的碱基数控制在15个左右，且使两侧按照上述计算得到的数值相近。
例如引物为agtcaggccaattcgaagcagtcgaattgccaag，其中蓝色的aag为突变位点，则
左侧：4X(GC碱基数)＋2X(AT碱基数)＝4X8＋2X7＝46≥45
右侧：4X(GC碱基数)＋2X(AT碱基数)＝4X8＋2X8＝48≥45
(4) 在可能的情况下，尽量把引物的GC含量控制在40％-60％。
(5) 在可能的情况下，尽量使引物不要产生非常稳定的二级结构和引物二聚体。二级结构和二聚体可以通过一些软件进行分析。
(6) 最好使用经过PAGE纯化的引物或更高纯度的引物。
2. 引物的配制：
如果合成得到的一个引物A的量是20nmol，另外一个互补引物B的量是19nmol。在引物A中加入200微升水，配制成浓度为100µM，在引物B中加入190微升水也配制成浓度为100µM。吸取20微升100µM引物A和20微升100µM引物B到一新的离心管中，再加入160微升水，混匀后即可得到可以直接用于基因定点突变反应的引物(10µM each)。
3. 待突变模板质粒的选择：
选择GC含量在40-55％的待突变模板质粒，并且每一个50bp左右的局部GC含量最好也不超过70%。如果GC含量过高，请先把目的基因克隆到其它合适的载体上，再进行基因定点突变反应。另外目的基因GC含量最好也在40-55％的范围，并且每一个50bp左右的局部GC含量最好也不超过70%。如果目的基因GC含量过高，而突变位点不在高GC含量区域，可以先把该基因的不含高GC含量的一个区域克隆出来，进行定点突变，然后再把突变后的片断克隆回原基因中。如果必需使用高GC含量的质粒模板，或者有局部高GC含量的质粒模板，请另外使用专门用于高GC含量模板的PCR反应试剂。
必需使用从dam＋的大肠杆菌(这类菌中质粒可以被甲基化)中抽提得到的质粒用于基因定点突变。常用的大部分大肠杆菌都是dam＋的，包括DH5α、JM109等。
4. 基因定点突变反应：
(1) 如下设置基因定点突变反应体系：
Nuclease-Free Water———>?µl
Reaction Buffer (10X)——>5µl
引物 (10µM each)————>2µl
dNTP Mix (2.5mM each)——>4µl
待突变模板质粒(0.5µg)——>?µl
总体积——————————>49µl
按照上面的顺序依次加入各种试剂。在上述反应体系中，根据待突变模板质粒的量，计算出需加入的Nuclease-Free Water的量，使总体积为49微升。适当混匀后，加入 1 ul Pfu DNA Polymerase，混匀。如果用的PCR仪没有热盖，在反应体系上加入一滴矿物油(mineral oil)以防止蒸发。
(2) 按照如下参数设置PCR仪：
| 步骤 | 循环数 | 温度 | 时间 | 说明 |
| 1 | 1 | 95℃ | 1分钟 | 最初变性 |
| 2 | 18 | 95℃ | 40秒 | 变性 |
| 60℃ | 1分钟 | 退火 | ||
| 68℃ | 1分钟/kb | 延伸 | ||
| 3 | 1 | 72℃ | 10分钟 | 延伸、补全 |
| 4 | 1 | 4℃ | 长时间保持 | 暂时存放 |
说明：上面表格中1分钟/kb表示，如果待突变的质粒为6kb，那么68℃的延伸时间为6分钟。
5. Dpn I消化：
PCR反应后，直接在PCR反应体系中加入1微升Dpn I，混匀后37℃孵育1小时。37℃孵育可以在PCR仪上进行，也可以在水浴锅中进行。Dpn I消化完毕后可以直接用于转化，或者-20℃保存备用。
6. 转化、挑克隆鉴定：
感受态细菌的转化效率必需至少在107以上，否则很难得到克隆。根据所使用的感受态细菌，加入尽量多的经过Dpn I消化后的突变产物用于转化。通常每100微升感受态细菌中可以加入5-10微升经过Dpn I消化后的突变产物。按照所使用的感受态细菌的操作方法进行操作，在涂板前通过离心浓缩的办法，把所有被转化后的细菌，全部涂布到含有适当抗生素的平板上，培养过夜。通常会得到50个以下的克隆。如果发现克隆有上千个，那么肯定是有什么地方出了问题。
对于得到的克隆，可以先挑克隆小抽酶切鉴定。以确认得到的质粒的大小和质粒中插入片断的大小与预期结果是否相符。
取3-5个酶切鉴定正确的克隆去测序，以最终确认得到的克隆是否是预期的突变克隆。通常大约每2个克隆中会得到一个预期的突变克隆。但有时也可能会因为随机因素，会测序了3-5个克隆才得到一个预期的突变克隆。
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北京百莱博科技有限公司是凝胶迁移EMSA产品的专业生产供应销售商，恭候您的咨询选购PPAR凝胶迁移突变探针(1.75μM)多少钱。
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