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标记细胞骨架步骤及注意事项
点击次数：417 发布时间：2016/7/25 9:03:06
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陈**
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标记细胞骨架步骤及注意事项 是许多同学才接触此类实验的疑问，简单为大家介绍步骤及注意事项
细胞骨架是由中等纤维、肌动蛋自丝和微管等一系列丝状结构所组成。研究细胞骨架组分最常用的方法是免疫荧光染色。然而也可用荧光素直接标记分离的细胞骨架蛋白，或者显微注射入细胞，或者直接加至固定的透化细胞。此外，还可使用从蘑菇中提取的荧光毒素，毒伞素来标记细胞骨架的F一肌动蛋白。
细胞骨架是由中等纤维、肌动蛋自丝和微管等一系列丝状结构所组成。研究细胞骨架组分最常用的方法是免疫荧光染色。然而也可用荧光素直接标记分离的细胞骨架蛋白，或者显微注射入细胞，或者直接加至固定的透化细胞。此外，还可使用从蘑菇中提取的荧光毒素，毒伞素来标记细胞骨架的F一肌动蛋白。
毒伞素可以用不同的荧光素标记，选择哪一种荧光素取决于毒伞素标记肌动蛋白是否是作为双标记的一部分。在大多数细胞内，丰富的肌动蛋白丝将提供一个很强的信号，在双标记实验中，选择荧光素时应考虑到这一点。一般来说，罗丹明标记更能抵抗光致漂白，故可用于暴露时间较长的精细结构的研究。用罗丹明毒伞素或荧光素毒伞素标记细胞骨架的F一肌动蛋白
注意事项
在pH8.0的水溶液中，异硫氰酸一罗丹明一毒伞索的最大激发光波长约为495nm,最大发射光波长约为520nm，用甲醇作溶剂时则分别为550nm和575nm.荧光索的发射光潜取决于溶液的PH和(或)离子强度。，观察时应使用荧光素或罗丹明各自的滤光器。对FRAP和共焦显微术而言，用488nm的氢离子激光作为荧光素的激发光，罗丹明则用514nm。甲醇固定的细胞用毒伞素染色效果不好，可能是因为破坏了肌动蛋自丝的罄体性所致。用0.2%的戊二醛PBS溶液固定则可以染色。
标记细胞骨架步骤及注意事项
原创作者：南京金益柏生物科技有限公司
