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细胞转运反应

点击次数：386 发布时间：2016/7/20 11:19:48

商家名片

陈**

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应该确定每一批胞质液的最佳浓度。胞质液组分可占到10%一8(1%的孵育体积:一个典型的反应体积为5U闪，含有胞质液、一个能量重建系统和一个含yrs的标志蛋白。

1)将含有上面说的成分的反应混合物加人一在冰卜放置的微量离心管中。能量重建系统成分如下:

5mmol/L磷酸肌酸

20单位/间肌酸磷酸激酶

0.5mmol/L ATP

0.5mmol/LL GTP

对于实验中是否需要ATP,GTP还有一些不同的看法，在任何一种系统为厂安伞起见，最好两者都加上加入的标志物浓度为O‘m仇吃杏洲过依标志物的批次和胞质液的活性而定，

2）滴一滴孵育混合物到一片位于带盖子的湿盒中的封口膜上_将带有通透细胞的盖玻片(按上文的方法制备)上多余缓冲液吸去。倒置于孵育液滴上。对所有样品，重复该步骤。对于悬浮培养细胞，可在一微量离心管中反应，细胞可以通过离心和用新鲜的转运缓冲液重悬浮来清洗。

3)所有样品都放好以后，盖上盒子，在30℃水浴中孵育30分钟。

4)在孵育的最后，用转运缓冲液漂洗细胞。于室温用} %v甲醛/转运缓冲液固定10分钟。小心:甲醛

5)在含有0_10!0苯二胺的转运缓冲液中，将盖玻片放到载玻片上。用指甲油封边。在荧光显微镜下观察。

原创作者：南京金益柏生物科技有限公司