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洗脱剂试验

点击次数：423 发布时间：2016/7/15 10:26:39

商家名片

陈**

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哪些洗脱剂在把抗体从抗原带上洗脱下来并达到理想的产量，依靠实践经验来确定是比较实用的。下面概述其基本原理。印迹定位标记的操作是严格的。一F面列举了一些应用成功的洗脱剂，但实际上任何能把抗体从抗原亲和层析柱下洗脱下来的试剂都应该是适合的。

2mo1lL甘氨酸，pH2.8

SmoI/I.乙酸，pH2.5

SmoIIL溶于水中或2pmmollL Tris溶液中，pH8.0(用前现配)

3mo}lL MgG}h溶于 2llrrrollL Tris, pHB.Do

小心:甘氨酸;酸碱溶液;;MgC12

1)按上述方法准备一定的印迹。从印迹上剪下足够的垂直区域以制备几个2一3mm宽的垂直带。阻断，用起始抗体孵化，冲洗。

2)把试验部分剪成几个垂直条带。一个条带作对照，用可能的洗脱液处理其他条带。合适的洗脱时间和多种洗脱剂要通过试验确定。

3)所有条带浸在PBS中，然后用次级抗体和比色或E(:I,(增强化学发光)试剂像上述

介绍方法处理。

1)当与未处理的对照条带相比较，评估哪种洗脱剂形成最低的保留信号。理论上这个试剂使抗体洗脱最多，抗体产生量也最多。有些苛刻的洗脱剂可以引起抗体变性，和(或)把抗原从印迹上洗脱下来。因此试验，但是需要不同方法的结合使用可能从印迹上能够获得最有用的抗体。

原创作者：南京金益柏生物科技有限公司