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使ELISA系统更稳定方法
点击次数：368 发布时间：2016/5/31 15:59:45
商家名片
陈**
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ELISA检测系统是免疫学反应应用到科研出产中最受欢迎的技术手段。
常用封锁剂有：0.05%-0.5%的BSA；10%的小牛血清或1%明胶；脱脂奶粉，比较价廉，可以高浓度使用（5%－10％）；还有一些稀有用到的各种动物血清（主要为了排除相似蛋白干扰）和酪蛋白等等。试验需要有扎实的理论知识外也需要大量的实践。但选用什么，需要依据试验实践来得出。
需留意以下几点：1.因为蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用，这种物理吸附长短特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响，大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。2.小分子必需依赖和大的蛋白载体偶联后才能固定在固相载体上。还有有的包被原可能不是蛋白，对于生物素和脂类物质或小分子物质我们要事先对其改造再加以包被。3.亲和素生物素:先亲和素先包被载体，加入生物素化的DNA，这种包被方法平均、牢固，已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。常用的包被液除了刚才提到的pH9.6碳酸盐缓冲液，还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。
需留意以下几点：1.因为蛋白质与聚苯乙烯固相载体是通过物理吸附结合的，靠的是蛋白质分子结构上的疏水基团与固相载体表面的疏水基团间的作用，这种物理吸附长短特异性的，受蛋白质的分子量、等电点、浓度等的影响，大分子蛋白质较小分子蛋白质通常含有更多的疏水基团，故更易吸附到固相载体表面。2.小分子必需依赖和大的蛋白载体偶联后才能固定在固相载体上。还有有的包被原可能不是蛋白，对于生物素和脂类物质或小分子物质我们要事先对其改造再加以包被。3.亲和素生物素:先亲和素先包被载体，加入生物素化的DNA，这种包被方法平均、牢固，已扩大应用于各种抗原物质的定量测定。常用的包被液除了刚才提到的pH9.6碳酸盐缓冲液，还有pH7.2的磷酸盐缓冲液和pH7-8的Tris-HCL缓冲液等等。
包被原的性质很重要，蛋白浓度有没有降解会影响大抗体可不可以被其识别，所以保留抗原很重要，在重组蛋白时一定要在冰浴下缓慢融化就是印证这个道理。
南京金益柏生物科技有限公司博客：http://blog.sina.com.cn/u/5889056072
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