免费代测牛环磷酸腺苷（cAMP）酶联ELISA试剂盒

本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中牛环磷酸腺苷(cAMP)水平。用纯化的牛环磷酸腺

苷(cAMP)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入环磷酸腺苷

(cAMP)，再与 HRP 标记的环磷酸腺苷(cAMP)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，

经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下

转化成最终的黄色。 颜色的深浅和样品中的环磷酸腺苷(cAMP)呈正相关。 用酶标仪在 450nm

波长下测定吸光度（OD 值） ，通过标准曲线计算样品中牛环磷酸腺苷(cAMP)浓度。

试剂盒组成：

试剂盒组成 48孔配置 96孔配置 保存

说明书 1 份 1份

封板膜 2片（48） 2片（96）

密封袋 1 个 1个

酶标包被板 1×48 1×96 2-8℃保存

标准品：13.5nmol/L 0.5ml×1 瓶 0.5ml×1瓶 2-8℃保存

标准品稀释液 1.5ml×1 瓶 1.5ml×1瓶 2-8℃保存

酶标试剂 3 ml×1 瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

样品稀释液 3 ml×1 瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

显色剂 A 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

显色剂 B 液 3 ml×1 瓶 6 ml×1瓶 2-8℃保存

终止液 3ml×1 瓶 6ml×1 瓶 2-8℃保存

浓缩洗涤液 （20ml×20倍）×1瓶 （20ml×30 倍）×1瓶 2-8℃保存

牛环磷酸腺苷（cAMP）酶联ELISA试剂盒样本处理及要求：

1. 血清：室温血液自然凝固 10-20 分钟，离心 20分钟左右（2000-3000 转/分） 。仔细收集上

清，保存过程中如出现沉淀，应再次离心。

2. 血浆：应根据标本的要求选择 EDTA或柠檬酸钠作为抗凝剂，混合 10-20 分钟后，离心

20 分钟左右（2000-3000 转/分） 。仔细收集上清，保存过程中如有沉淀形成，应该再次

离心。

3. 尿液：用无菌管收集，离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分） 。仔细收集上清，保存过程

中如有沉淀形成，应再次离心。胸腹水、脑脊液参照实行。

4. 细胞培养上清：检测分泌性的成份时，用无菌管收集。离心 20分钟左右（2000-3000 转/

分） 。仔细收集上清。检测细胞内的成份时，用 PBS（PH7.2-7.4）稀释细胞悬液，细胞

浓度达到 100万/ml 左右。通过反复冻融，以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心 20 分2

钟左右（2000-3000转/分） 。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成，应再次离心。

5. 组织标本：切割标本后，称取重量。加入一定量的 PBS，PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备

用。标本融化后仍然保持 2-8℃的温度。加入一定量的 PBS（PH7.4） ，用手工或匀浆器

将标本匀浆充分。离心 20 分钟左右（2000-3000 转/分） 。仔细收集上清。分装后一份待

检测，其余冷冻备用。

6. 标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能马上

进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融.

7. 不能检测含 NaN3的样品，因 NaN3 抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。

牛环磷酸腺苷（cAMP）酶联ELISA试剂盒操作步骤：

1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔 10孔，在第一、第二孔中分别加标

准品 100μl，然后在第一、第二孔中加标准品稀释液 50μl，混匀；然后从第一孔、第二

孔中各取 100μl 分别加到第三孔和第四孔， 再在第三、 第四孔分别加标准品稀释液 50μl，

混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 弃掉，再各取 50μl 分别加到第五、第六孔

中，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液 50ul，混匀；混匀后从第五、第六孔中各

取 50μl 分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液 50μl，混

匀后从第七、第八孔中分别取 50μl 加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准

品稀释液 50μl，混匀后从第九第十孔中各取 50μl 弃掉。 （稀释后各孔加样量都为 50μl，

浓度分别为 9nmol/L，6nmol/L ，3nmol/L，1.5nmol/L， 0.75nmol/L） 。

2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同） 、待测样

品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液 40μl，然后再加待测样品 10μl（样

品最终稀释度为 5 倍） 。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混

匀。

3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30分钟。

4. 配液：将 30（48T 的 20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30（48T 的 20 倍）倍稀释后备用。

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此

重复 5次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50μl，空白孔除外。

7. 温育：操作同 3。

8. 洗涤：操作同 5。

9. 显色：每孔先加入显色剂 A50μl，再加入显色剂 B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色

15分钟.

10. 终止：每孔加终止液 50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色） 。

11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD 值） 。 测定应在加终止

液后 15分钟以内进行。