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酶联免疫测定（ELISA）的实验检测

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上传时间：2016/11/24 16:57:31

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上传者：上海谷研生物科技有限公司

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免疫测定的实验设计主要涉及到抗体或抗原的使用浓度、温育温度、温育时间、测定模式是采用竞争抑制或双夹心直接测定，以及双夹心测定是采用一步还是两步法等，其对测定的影响主要是试验的测定下限、特异性核简便性等。一般来说，较高的抗体或抗原反应浓度、较高的温育温度（如37~C而非室温下）、较长的温育时间可以改善免疫试验的测定下限，但这一切又只是相对的，还要从试剂的实际应用着想，进行合理的优化。双抗夹心酶免疫试剂由于其简单方便，又具有较好的测定下限和特异性，在大多数蛋白激索和肿瘤标志物的测定上，现已基本上取代了放免竞争抑制试验。双抗夹心测定模式以两步法进行（即临床样本与酶标抗体分两步加入），可避免许多用一步法时可能会出现的问题，如与标记抗体可能发生交叉反应但与固相捕获抗体无交叉反应的物质可在第一步温育后的洗涤步骤中去除；又如一步法常出现的“钩状”效应（即抗原浓度很高时反应显色反而很浅，表现为测假阳性）使用两步法就可以避免。但由于两步法所需测定时间相对要长一些，因此目前在临床实验中使用较多的是一步法。此外，当所测物质分子大小不一致时，大分子的反应通常较小分子要慢，如温育时间短，也会造成测定偏差。例如，在测定复合的前列腺特异抗原（PSA）（Mr90Kd）时，如使用较短的温育时间，与游离PSA相比，其结果将偏低。