ELISA检测试剂盒的研发与应用

利用ELISA技术研发一种灵敏、快速检测人血清中脑红蛋白（Ngb）含量的检测试剂盒,并探讨其在正常人血清样本检测中的应用。方法：采用热诱导的原核表达体系获得重组人源脑红蛋白（rhNgb）,通过凝胶过滤和阴离子交换层析等制备rhNgb纯品;将适量rhNgb纯品免疫动物获得抗rhNgb单克隆抗体和多克隆抗体;用双抗体夹心ELISA技术制备rhNgb-ELISA检测试剂盒;用该试剂盒对410例正常人血清中Ngb的含量进行检测,其中包括1.5岁以下婴儿血清55例、19～70岁成人血清355例。结果：用制备的rhNgb-elisa试剂盒检测发现Ngb在正常人血清中的分布与年龄存在明显的相关性,表现为＂两头高、中间低＂的趋势,婴儿和老年人血清中Ngb的含量分别为1.6708±0.4945和2.1962±0.6703μmol/L,而中年人血清中Ngb的含量为0.3622±0.0716μmol/L。结论：采用双抗夹心ELISA技术并结合严格的质量控制,研发了高效灵敏的rhNgb-ELISA检测试剂盒,并初步获得了正常人血清中Ngb的含量分布情况