联系我们
联系人：王经理
技术文章
ELISA检测两种办法的比拟
点击次数：122 发布时间：2016/7/18 13:43:17
商家名片
王**
联系我时，请说明是阿仪网看到的，谢谢!
- 电话: 02*******894
- 手机: 13******131
- 微信:
- 交换名片后展示联系方式 → →
elisa试剂盒在实践应用中，经过不同的设计，详细的办法步骤可有多种。即:用于检测抗体的间接法、用于检测抗原的双抗体夹心法以及用于检测小分子抗原或半抗原的抗原竞争法等等。比拟常用的是ELISA双抗体夹心法及ELISA间接法。
办法一 用于检测未知抗原的双抗体夹心法：
1. 包被：用0.05M PH9.牰碳酸盐包被缓冲液将抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg／ml。在每个聚苯乙烯板的反响孔中加0.1ml，4℃过夜。次日，弃去孔内溶液，用洗濯缓冲液洗3次，每次3分钟。（简称洗濯，下同）。
2. 加样：加一定稀释的待检样品0.1ml于上述已包被之反响孔中，置37℃孵育1小时。然后洗濯。（同时做空白孔，阴性对照孔及阳性对照孔）。
3. 加酶标抗体：于各反响孔中，参加新颖稀释的酶标抗体（经滴定后的稀释度）0.1ml。37℃孵育0.5～1小时，洗濯。
4. 加底物液显色：于各反响孔中参加暂时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟5. 终止反响：于各反响孔中参加2M硫酸0.05ml。
6. 结果断定：可于白色背景上，直接用肉眼察看结果：反响孔内颜色越深，阳性水平越强，阴性反响为无色或极浅，根据所呈颜色的深浅，以“+"、“-"号表示。也可测O?D值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔O?D值，若大于规则的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
办法二 用于检测未知抗体的间接法：
1. 用包被缓冲液将已知抗原稀释至1～10μg／ml，每孔加0.1ml，4℃过夜。
2. 次日洗濯3次。加一定稀释的待检样品（未知抗体）0.1ml于上述已包被之反响孔中,置37℃孵育1小时,洗濯。同时做空白、阴性及阳性孔对照于反响孔中，参加新颖稀释的酶标第二抗体（抗抗体）0.1ml，37℃孵育30-60分钟，洗濯,最后一遍用DDW（超纯水）洗濯。其他步骤同“双抗体夹心法"的4、5、6。
3. 加底物液显色：于各反响孔中参加暂时配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃10～30分钟。4. 终止反响：于各反响孔中参加2M硫酸0.05ml。
5. 结果断定：可于白色背景上，直接用肉眼察看结果：反响孔内颜色越深，阳性水平越强，阴性反响为无色或极浅，根据所呈颜色的深浅，以“+"、“-"号表示。也可测O?D值：在ELISA检测仪上，于450nm（若以ABTS显色，则410nm）处，以空白对照孔调零后测各孔O?D值，若大于规则的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。
原创作者：上海邦景实业有限公司
