如何掌握ELISA检测系统的关键要素

在ELISA检测系统的关键要素中，包被原的性质很重要，蛋白浓度，是否降解，这关系到你做出的抗体可不可以被其识别，所以保留抗原很重要，做重组蛋白时，一定要在冰浴下缓慢融化就是这个道理。封锁就是让大量不相关的蛋白质充填这些旷地空闲，从而排斥ELISA后的步骤中干扰物质的再吸附。但有时因为试验的需要，包被原的特殊性也可能采用中性的缓冲溶液来包。

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。该法适于测定细胞培养上清、血清、血浆及组织液中的样本，干扰小可以测到每毫升纳克水平的细胞因子（或受体）的水平。在这种测定方法中有3种必要的试剂：①固相的抗原或抗体；②酶标记的抗原或抗体；③酶作用的底物。
根据elisa试剂盒试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件，可设计出各种不同类型的检测方法。
（1） 双抗体夹心法；
（2） 双位点一步法；
（3） 间接法测抗体；
（4） 竞争法；
（5） 捕获法测IgM抗体；
（6） 应用亲和素和生物素。
试剂盒普遍用作非放射性同位素的成键化验。在这种方法中，通常标准配体是固定的，通过加入溶液相受体或蛋白质来使之成键。通过加入与受体特异性反应的抗体来定量成键的受体，而且最初抗体的量以加入第二种能显色的抗体测量。第二种抗体能识别抗体的末端，在其末端的碱性磷酸酯或过氧化物酶等与酶发生反应，从而使溶液显色。