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琼脂糖核酸电泳

点击次数:375 发布时间:2015/10/19 9:53:29
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1.用蒸馏水将制胶模具和梳子冲洗干净,放在制胶平板上,封闭模具边缘,架

好梳子;

2.根据欲分离DNA 片段大小用凝胶缓冲液配制适宜浓度的琼脂糖凝胶,称量琼脂糖干粉,加入到配胶用的三角烧瓶内,定量加入1XTAE电泳缓冲液(一般

20~30 ml);

3.放入到微波炉内加热熔化,如熔化不完全(溶液中有悬浮颗粒),应调到中低档再加热熔化,直至无悬浮颗粒,冷却片刻.

倒入电泳槽中,室温下30~45 分钟后凝胶完全凝结,小心拔出梳子,将凝胶安放在电泳槽内;

4.向电泳槽中倒入电泳缓冲液,其量以没过胶面1mm 为宜,如样品孔内有气

泡,应设法除去;

5.在DNA 样品中加入6×或10×体积的载样缓冲液(load ing buffer),混匀后,用枪将样品混合液缓慢加入被浸没的凝胶加样孔内;

6.接通电源,红色为正极,黑色为负极,切记DNA 样品由负极往正极泳动(靠

近加样孔的一端为负)。一般120V 电压,电泳30min 即可,根据指示剂泳动的位置,判断是否终止电泳;

7.电泳完毕,关上电源,将胶放入专用含EB的塑料盒中(EB具致癌性,接触含EB的东西时应该戴一次性手套),浸泡10-20min,在凝胶成像仪上观察电泳带及其位置,并与核酸分子量标准Marker 比较被扩增产物的大小。

原创作者:武汉博欧特生物科技有限公司

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