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IL-2生物学活性检测实验步骤

点击次数：276 发布时间：2016/3/14 13:08:40

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一、人外周血T细胞分泌IL-2的诱生

1. 人PBMC分离：采用常规淋巴细胞分层液浓度梯度离心法分离PBMC，用10%FCS-RPMI-1640培养液调整细胞浓度为

2. 加样：接种细胞悬液于24孔培养板，每孔0.51 ml，每孔再加PHA 0.5 ml，37度，5%CO2孵育48小时。

3. 回收上清：吸出细胞培养上清，12000 r/min 离心15分钟，收集上清，-20度冻存。

二、IL-2生物活性测定

1. CTLL-2细胞制备：取传代培养24~48小时对数生长期的CTLL-2细胞，用培养液离心洗涤2次，每次1000 r/min 离心5分钟，再用10%FCS-RPMI-1640培养液调制细胞浓度为1×105/ml。

2. 加样：将细胞接种于96孔培养板，每孔0.1 ml。同时将待测样品和标准品做倍比稀释，每孔加入0.1 ml，每个稀释浓度均设3复孔。另设培养液对照孔（100 ul 细胞+100 ul 培养液）。37度，5%CO2孵育40小时。

3. MTT掺入：轻轻吸取上清液100 ul，加MTT（1 mg/ml）100 ul，37度，5%CO2孵育2小时。

4. 测定：离心培养板，2000 r/min，5分钟，吸弃上清液，每孔加100 ul DMSO，作用30分钟，用酶标测定仪于波长570 nm 测吸光值（A）。

5. 计算：用标准品浓度和对应的净A570 nm 值（实验孔-阴性对照孔的A570 nm值）绘制标准曲线。根据标准曲线求出待测样品IL-2水平。

原创作者：上海雅吉生物科技有限公司