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白果内酯抗大鼠卡氏肺孢子虫肺炎实验研究
点击次数：265 发布时间：2016/2/18 8:32:36
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卡氏肺孢子虫肺炎(Pneumoeystis carinii pneumonia，PCP)是一种机会性 致病的感染性疾病，好发于免疫功能低下或缺陷人群，其病理损害主要表现 为肺组织问质性病变。随着社会的进步，人们生活水平的提高以及人均寿 命的延长，近年来糖尿病晚期患者、肿瘤化疗者以及艾滋病患者等高危人群 进一步扩大，使本病成为此类人群的重要死亡原因。国内外防PCP的主要 药物为磺胺、戊烷脒等，这类药物虽能收到较好的疗效，但存在明显的毒副 作用，耐药性的发生率也明显增加 J。鉴于西药的副作用，国内有部分学 者_2I5j用中药黄芪、白果、大蒜、青蒿等治疗大鼠卡氏肺孢子虫肺炎，起到一 定的治疗效果。本研究通过动物实验，观察白果内酯联合黄芪注射液抗大 鼠卡氏肺孢子虫肺炎的疗效，并与复方磺胺甲基异恶唑治疗进行对比，比较 两种治疗方案之间疗效的优劣，为临床治疗提供理论基础。
1．材料和方法
1．1 PCP模型的建立：选用4o只清洁级sD大鼠体重180—220g(湖南 中医药大学实验动物中心购置)，敞式鼠笼中用普通颗粒饲料喂养。随机抽 取2只大鼠，无菌状态下皮下注射生理盐水0．5mL只，作为正常对照组。其 余大鼠均于无菌状态下腹股沟处皮下注射地塞米松磷酸钠(1IT-g／只，2次／ 周)。实验组和对照组大鼠饮水中均加入1g／L的盐酸四环素。预防继发细 菌感染。随时观察大鼠变化，包括进食、饮水量和体重变化、毛色改变及活 动情况。持续诱导9周后，随机无菌剖杀实验组大鼠2只、正常对照组大鼠 2只。以肺切面印于洁净载玻片制成肺组织印片，固定干燥后，采用六亚甲 基四胺银(GMS)快速染色法染色 j，油镜下观察，对照组无异常，实验组找 到大量卡氏肺孢子虫包囊，证实PCP大鼠模型建立成功。
1．2 药物及试剂：白果内酯(Sigma公司)，黄芪注射液(成都地奥九泓 制药厂)，用0．8ml无水乙醇溶解40rag白果内酯，然后加黄芪注射液9．2ml 制成白果黄芪水溶液；地塞米松磷酸钠(天津制药厂)；四环素粉(华北制药 厂天星有限公司)；复方磺胺甲基异恶唑片(昆明制药集团股份有限公司)。 1．3 实验大鼠分组及治疗：模型建立成功后停止注射地塞米松磷酸 钠，而实验大鼠诱发过程中自然死亡3只，将患PCP大鼠33只随机分为3 组，每组11只。A组为感染对照组，不予任何药物治疗；B组为白果黄芪水 溶液治疗组，0．5mL／只，腹腔内注射，2次／日，连续10日；C组为复方磺胺甲 基异恶唑治疗组，复方磺胺甲基异恶唑制成悬液，l片复方磺胺甲基异恶唑 溶于20mLNS中，1ml／次／日灌胃，治疗10日，停药观察1周后全部剖杀，无 菌取肺。
1．4 观察指标及方法：3组大鼠剖杀后，取肺组织，切开肺叶，作直径 1cm的印片，采用GMS法染色，油镜下观察，每鼠肺印片计数100个油镜视 野包囊总数，最后计算出每组鼠肺印片中肺孢子虫包囊的平均数。取肺组 织置于10％ 甲醛溶液中固定，制成病理切片HE染色，进行观察。
I．5 统计处理：对每组鼠肺印片中肺孢子虫包囊的平均数采用 SPSS15．0软件处理，进行统计分析。
2．结果
2．1 发病基本情况观察。治疗前，3组大鼠普遍存在少动厌食、体毛蓬 松、毛色灰暗、呼吸困难等表现。经白果黄芪水溶液或复方磺胺甲基异恶唑治疗后，B、C两组大鼠食量增加、毛色光泽，呼吸困难减轻。
2．2 大鼠肺重、体重变化。由(表l可见)，各组大鼠在实验结束时的 平均体重均有所下降，其中A模型对照组下降最明显，大于B组和C组，但 经统计学分析，差异均无统计学意义(P>0．05)。对3组大鼠实验完成时平 均肺重、肺重／体重比分析发现，A组肺重、肺重／体重比最高，且与其他两组 比较差异均有统计学意义(P<0．05)。
2．3 肺印片中肺孢子虫感染程度及包囊数量变化。卡氏肺孢子虫肺 炎大鼠模型建立后，经相应的中西药治疗，无菌操作下剖杀取肺，观察各组 大鼠的肺组织印片中感染卡氏肺孢子虫的包囊数目。我们发现A组大鼠的 肺组织印片中Pc感染率非常高，而经药物治疗后，B组和C组的肺组织印 片Pc感染率明显降低(见图1)。
各组大鼠肺印片每100个油镜视野肺孢子虫包囊均数(见表2)。经分 析，B组和C组每100个油镜视野肺孢子虫包囊均数均明显低于A组，差异 有显著性(P<0．01)。
2．4 肺组织病理学检查。PCP模型对照组(A组)：中一重度间质性肺 炎，肺泡间隔增宽，肺泡腔变小，肺泡上皮增生，间隔增宽，问质内有以淋巴 细胞、单核细胞为主的细胞浸润，部分肺泡腔内充满淡红色泡沫样渗出物 (图1)；白果黄芪水溶液治疗组(B组)：轻度问质性肺炎，肺泡内偶见少量 嗜酸性泡沫物，可见泡沫细胞聚集，炎症细胞较少，肺泡间隔较窄(图2)；复 方磺胺甲基异恶唑片治疗组(C组)：轻度间质性肺炎，肺泡腔大小不一，肺 泡间隔较宽，肺泡内可见少量嗜酸性泡沫细胞(图3)
3．讨论
目前，国内外建立PCP动物模型方法最常用的是利用糖皮质激素(醋酸 可的松或地塞米松)抑制大鼠免疫系统诱发PCP模型，本实验采用此方法造 模成功，进一步表明利用地塞米松建立大鼠PCP模型是一种稳定、可靠的方 法。现代药理学研究表明，黄芪具有明显的抗缺氧、抗炎、镇痛和调节免疫 的功能，白果内酯具有一定抗卡氏肺孢子虫肺炎作用L 2-3]。本实验将白果 内酯联合黄芪注射液用于治疗大鼠卡氏肺孢子虫肺炎，选用肺质量／体质量 的值及肺印片每100个油镜视野肺孢子虫包囊均数作为评价指标，并结合 病理综合观察判断药物抗肺孢子虫作用。上述研究结果显示白果内酯联合 黄芪注射液对大鼠PCP有明显治疗效果，且为发现毒副作用。因此，白果内酯联合黄芪注射液有望应用于临床治疗卡氏肺孢子虫，然而其作用机制，还 需要进一步深入研究。
1．材料和方法
1．1 PCP模型的建立：选用4o只清洁级sD大鼠体重180—220g(湖南 中医药大学实验动物中心购置)，敞式鼠笼中用普通颗粒饲料喂养。随机抽 取2只大鼠，无菌状态下皮下注射生理盐水0．5mL只，作为正常对照组。其 余大鼠均于无菌状态下腹股沟处皮下注射地塞米松磷酸钠(1IT-g／只，2次／ 周)。实验组和对照组大鼠饮水中均加入1g／L的盐酸四环素。预防继发细 菌感染。随时观察大鼠变化，包括进食、饮水量和体重变化、毛色改变及活 动情况。持续诱导9周后，随机无菌剖杀实验组大鼠2只、正常对照组大鼠 2只。以肺切面印于洁净载玻片制成肺组织印片，固定干燥后，采用六亚甲 基四胺银(GMS)快速染色法染色 j，油镜下观察，对照组无异常，实验组找 到大量卡氏肺孢子虫包囊，证实PCP大鼠模型建立成功。
1．2 药物及试剂：白果内酯(Sigma公司)，黄芪注射液(成都地奥九泓 制药厂)，用0．8ml无水乙醇溶解40rag白果内酯，然后加黄芪注射液9．2ml 制成白果黄芪水溶液；地塞米松磷酸钠(天津制药厂)；四环素粉(华北制药 厂天星有限公司)；复方磺胺甲基异恶唑片(昆明制药集团股份有限公司)。 1．3 实验大鼠分组及治疗：模型建立成功后停止注射地塞米松磷酸 钠，而实验大鼠诱发过程中自然死亡3只，将患PCP大鼠33只随机分为3 组，每组11只。A组为感染对照组，不予任何药物治疗；B组为白果黄芪水 溶液治疗组，0．5mL／只，腹腔内注射，2次／日，连续10日；C组为复方磺胺甲 基异恶唑治疗组，复方磺胺甲基异恶唑制成悬液，l片复方磺胺甲基异恶唑 溶于20mLNS中，1ml／次／日灌胃，治疗10日，停药观察1周后全部剖杀，无 菌取肺。
1．4 观察指标及方法：3组大鼠剖杀后，取肺组织，切开肺叶，作直径 1cm的印片，采用GMS法染色，油镜下观察，每鼠肺印片计数100个油镜视 野包囊总数，最后计算出每组鼠肺印片中肺孢子虫包囊的平均数。取肺组 织置于10％ 甲醛溶液中固定，制成病理切片HE染色，进行观察。
I．5 统计处理：对每组鼠肺印片中肺孢子虫包囊的平均数采用 SPSS15．0软件处理，进行统计分析。
2．结果
2．1 发病基本情况观察。治疗前，3组大鼠普遍存在少动厌食、体毛蓬 松、毛色灰暗、呼吸困难等表现。经白果黄芪水溶液或复方磺胺甲基异恶唑治疗后，B、C两组大鼠食量增加、毛色光泽，呼吸困难减轻。
2．2 大鼠肺重、体重变化。由(表l可见)，各组大鼠在实验结束时的 平均体重均有所下降，其中A模型对照组下降最明显，大于B组和C组，但 经统计学分析，差异均无统计学意义(P>0．05)。对3组大鼠实验完成时平 均肺重、肺重／体重比分析发现，A组肺重、肺重／体重比最高，且与其他两组 比较差异均有统计学意义(P<0．05)。
2．3 肺印片中肺孢子虫感染程度及包囊数量变化。卡氏肺孢子虫肺 炎大鼠模型建立后，经相应的中西药治疗，无菌操作下剖杀取肺，观察各组 大鼠的肺组织印片中感染卡氏肺孢子虫的包囊数目。我们发现A组大鼠的 肺组织印片中Pc感染率非常高，而经药物治疗后，B组和C组的肺组织印 片Pc感染率明显降低(见图1)。
各组大鼠肺印片每100个油镜视野肺孢子虫包囊均数(见表2)。经分 析，B组和C组每100个油镜视野肺孢子虫包囊均数均明显低于A组，差异 有显著性(P<0．01)。
2．4 肺组织病理学检查。PCP模型对照组(A组)：中一重度间质性肺 炎，肺泡间隔增宽，肺泡腔变小，肺泡上皮增生，间隔增宽，问质内有以淋巴 细胞、单核细胞为主的细胞浸润，部分肺泡腔内充满淡红色泡沫样渗出物 (图1)；白果黄芪水溶液治疗组(B组)：轻度问质性肺炎，肺泡内偶见少量 嗜酸性泡沫物，可见泡沫细胞聚集，炎症细胞较少，肺泡间隔较窄(图2)；复 方磺胺甲基异恶唑片治疗组(C组)：轻度间质性肺炎，肺泡腔大小不一，肺 泡间隔较宽，肺泡内可见少量嗜酸性泡沫细胞(图3)
3．讨论
目前，国内外建立PCP动物模型方法最常用的是利用糖皮质激素(醋酸 可的松或地塞米松)抑制大鼠免疫系统诱发PCP模型，本实验采用此方法造 模成功，进一步表明利用地塞米松建立大鼠PCP模型是一种稳定、可靠的方 法。现代药理学研究表明，黄芪具有明显的抗缺氧、抗炎、镇痛和调节免疫 的功能，白果内酯具有一定抗卡氏肺孢子虫肺炎作用L 2-3]。本实验将白果 内酯联合黄芪注射液用于治疗大鼠卡氏肺孢子虫肺炎，选用肺质量／体质量 的值及肺印片每100个油镜视野肺孢子虫包囊均数作为评价指标，并结合 病理综合观察判断药物抗肺孢子虫作用。上述研究结果显示白果内酯联合 黄芪注射液对大鼠PCP有明显治疗效果，且为发现毒副作用。因此，白果内酯联合黄芪注射液有望应用于临床治疗卡氏肺孢子虫，然而其作用机制，还 需要进一步深入研究。
原创作者：上海雅吉生物科技有限公司
