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真核细胞转染实验步骤
点击次数：215 发布时间：2015/11/9 8:32:02
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真核细胞转染实验步骤
学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法——脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法，观测外源蛋白的表达（绿色荧光蛋白），为染色准备实验材料。
真核细胞转染实验步骤
1. 在6孔板中接种1~3×105细胞/孔，加入2ml完全培养基，置CO2孵箱中37℃培养过夜。
学习和掌握外源基因导入真核细胞的主要方法——脂质体介导的转染。了解外源基因进入的一般性方法，观测外源蛋白的表达（绿色荧光蛋白），为染色准备实验材料。
真核细胞转染实验步骤
1. 在6孔板中接种1~3×105细胞/孔，加入2ml完全培养基，置CO2孵箱中37℃培养过夜。
2. 待细胞长到50-80%单层时，在无菌离心管中配制如下溶液：
i. 溶液A：将4?g待转染的超纯DNA稀释到250?l无血清培养基中，静置5min
ii. 溶液B：将2-25?l LipofectAMINE 稀释到250?l无血清培养基中，静置5min
3. 混合溶液A和B，轻轻混匀，室温放置15-45min。
4. 用2ml无血清培养基轻轻洗涤细胞，加入0.8ml无血清培养基/孔，将脂质体复合物滴加到孔中，轻轻摇晃混匀，置CO2孵箱中37℃孵育2-24hr。
5. 用完全培养基替换转染液，继续培养。
6. 24-72hr后检测蛋白质的表达或传代并加入选择性抗生素以筛选稳定表达株。真核细胞转染实验步骤
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