雅吉教您氯化锂法提取总RNA

氯化锂法提取总RNA

本方法用高浓度尿素变性蛋白并抑制RNA 酶，用氯化锂选择沉淀RNA ，其特别适合于从大量样品中提取少量组织RNA ，具有快速简洁的长处，但也存在少量DNA的污染及RNA 得率不高，小RNA 片断丢失的缺陷。

氯化锂法提取总RNA

氯化锂/尿素溶液【氯化锂126g(3M) 尿素、360g(6M) 加水至1L，过滤灭菌】

悬浮液【10mM Tris-HCL (pH7.6) ，1mM EDTA (pH8，0) ，0.5%SDS】

其余同上

氯化锂法提取总RNA，操作步骤：

1：对于大量组织或细胞，则每克组织或细胞加入5－10ml氯化锂－尿素溶液，匀桨器高速匀桨2分钟；对于少量细胞（107个细胞/ml），则每克组织或细胞加入0.5ml氯化锂－尿素溶液手工匀桨，并转移至Eppendof管中

2：匀桨液在0－4℃放置4小时后，12000g离心30分钟

3：取沉淀，加入原匀桨液1/2体积的氯化锂－尿素溶液，重复步骤2

4：沉淀用原匀桨液1/2体积的氯化锂－尿素溶液复溶后，加入等体积酚//异戊醇在室温放置15－30分钟并不时摇动混匀，4000g离心5分钟

5：取上层水相，加1/10倍体积的3M乙酸钠（pH5.2）及2倍体积的乙醇，－20℃放置1小时，5000g离心。

6：70%乙醇洗沉淀一次。真空干燥。

7：RNA 溶解液溶解沉淀，得RNA ，分装，于－70℃保存。氯化锂法提取总RNA

原创作者：上海雅吉生物科技有限公司