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Ca-ATP酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书
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上传时间：2015/10/22 17:31:01
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上 传 者：南京安培化工科技有限公司
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Ca-ATP酶活性比色法定量检测试剂盒产品说明书
主要用途
ATP酶存在于组织细胞及细胞器的膜上，是生物膜上的一种蛋白酶，机体在缺氧及等状态下，ATP酶受到损伤，活力下降。ATP酶活力的大小是各种细胞能量代谢及功能有无损伤的重要指标。本测试盒可测钠钾—ATP酶、钙镁—ATP酶的活性。样品为各种组织及红细胞等，本法的最大特点是样品前处理不需要高速离心机，方法简便、快速。
产品内容
缓冲液（Reagent A） 6毫升
反应液（Reagent B） 6毫升
底物液（Reagent C） 6 毫升
阴性液（Reagent D） 6毫升
标准品（reagent E） 6 微升
产品说明书 1 份
保存方式
保存反应液（Reagent B）和底物液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在 4℃ 冰箱里；底物液（Reagent C）避免光照，有效保证 6 月
用户自备
1.5 毫升离心管：用于反应液配制的容器
微型台式离心机：用于样品制备
比色皿或酶标板：用于比色的容器
分光光度仪：用于比色分析
酶标仪：用于微量样品比色分析
实验步骤
实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂盒中的反应液（Reagent B）和底物液（Reagent C） 置入冰槽里融化。底物液（Reagent C）避免光照。然后进行下列操作。
一、 样品准备
选择一：血浆样品
1． 准备好 ACD 抗凝管（注意：避免使用肝素或 EDTA 抗凝管）
2． 抽取 2 毫升血液，置于抗凝管里
3． 放进 4℃微型台式离心机离心 10 分钟，速度为 5000 g
4． 小心移取上层黄色液体到新的 1.5 毫升离心管――此为血浆成分（注意：避免触碰白色液体层）
5． 即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存
6． （选择步骤）移取50 微升进行蛋白定量测定
选择二：血清样品
1． 准备好不含抗凝剂的储存管
2． 抽取 2 毫升血液，置于储存管里
3． 室温下，静置 30 分钟，直至血液凝结
4． 放进 4℃微型台式离心机离心 15 分钟，速度为 5000 g
5． 小心移取上层黄色液体到新的 1.5 毫升离心管――此为血清成分（注意：避免触碰白色液体层）
6． 即刻置于冰槽里备用或放进－70℃冰箱里保存
7． （选择步骤）移取 50 微升进行蛋白定量测定
选择三：组织样本
准确称取组织重量，按照重量（g）：体积（ml）=1:9的比例，加入9倍的是PBS或者生理盐水，冰水浴条件下机械匀浆，2500转/分，离心10分钟，去上清液待测。
二、 测定准备
1. 准备好上述待测样品，置于冰槽里
2. 设定好分光光度仪（温度为 37℃）：波长 440nm
三、样本测定
1． 在 96 孔酶标板上做好相应标记：背景对照，标准品孔和样品孔
2． 分别移取 50微升缓冲液（Reagent A）到相应孔中
3． 设定标准品孔(加入50微升标准品），样本孔(加入50微升样本)阴性液孔(加入 50微升阴性液（Reagent D）
4． 分别加入50微升反应液（Reagent B）
5． 轻轻摇动 96 孔酶标板
6． 在 37℃温度下孵育 2 分钟
7． 放进酶标仪，置零
8． 取出酶标板，分别加入 50微升底物液（Reagent C）
9． 轻轻摇动酶标板
10．即刻放进酶标仪检测，包括（0 分钟初始读数和 5 分钟读数）
四，样本计算
样本活性=样本OD值/标准OD值*标品浓度
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