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细胞培养急救秘籍（上）
点击次数：875 发布时间：2019/12/17 11:18:59
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钱**
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细胞培养实验中，经常会遇到很多问题，为解救细胞，就得对症下药才行。一般细胞出现问题的原因可以从5个方面来着手。只要抓住这5点，救细胞就是小case。
细胞自身问题（种子好不好很重要）
如果你使用的细胞已经是很多代之后的了，培养的时候就会力不从心，可以重新复苏更原始的细胞进行培养。
如果你使用的是冻存的细胞，那就有可能在冻存时该细胞的增殖能力就很弱了，可以通过查看以往的操作记录来判断。
还有一点就是个体差异，可以在培养前通过已知的标准对样本进行筛选，从而减少个体差异带来的影响。
外源污染
如果相同来源的其它批次的细胞并没有出现问题，你就要思考一下你是不是“中奖了”。请及时对可疑细胞以及培养使用的试剂进行隔离。
细菌污染
细菌是一种原核细胞微生物，其大小以微米(μm)计。
常见的污染细菌有革兰氏阴性菌和大肠杆菌、假单胞菌等，革兰氏阴性菌中白色葡萄球菌等比较常见。
一旦发生细菌污染较易发现，多数情况下培养液短期内颜色变黄，表明有大量酸性物质产生，出现明显混浊现象；有时静置的培养液液体初看不混浊，但稍加振荡，就有很多混浊物漂起。倒置显微镜下观察，可见培养液中有大量圆球状颗粒漂浮。必要时可取少量培养液涂片染色检查以证实细菌种类；有的培养液改变不明显而又疑有污染，可取出少量培养液用普通肉汤接种或用未加双抗药物的培养液接种，也可取10ml细胞悬液以100rpm离心5min，沉淀中加入无抗生素的培养液2ml，置于37℃培养，24h可得结果。
污染后细胞发生病理改变，胞内颗粒增多、增粗，最后变圆脱落死亡，造成试验失败和细胞株(系)丢失。
解决方案：
(1) 丢弃所有已经污染的细胞和培养基；
(2) 培养环境用新洁尔灭擦拭且UV灭菌24小时；
(3) 培养试剂中加入P/S双抗；
(4) 尽可能使用一次性耗材及成品培养基；
真菌污染
真菌污染是细胞培养过程中最常见的一种，尤其在梅雨季节进行细胞培养更易污染。
污染培养细胞的多为烟曲霉、黑曲霉、毛霉菌、孢子霉、白念珠菌、酵母菌等。
霉菌污染后多数在培养液中形成白色或浅黄色漂浮物。一般肉眼可见，较易被发现，短期内培养液多不混浊，倒置显微镜下可见于细胞之间纵横交错穿行的丝状、管状、及树枝状菌丝，并悬浮飘荡在培养液中。很多菌丝在高倍镜可见到有链状排列的菌珠；念珠菌或酵母菌形态呈卵形，散在细胞周边和细胞之间生长。镜下看时，要将培养瓶用酒精棉球擦干净，以防止与瓶外尤其瓶底外面生长的菌丝相混淆。
真菌污染后，细胞生长变慢，但最后由于营养耗尽及毒性作用而使细胞脱落死亡。
解决方案：
(1) 丢弃所有已经污染的细胞和培养基；
(2) 培养环境用甲醛熏蒸；
(3) 培养试剂中加入两性霉素B；
(4) 尽可能保持细胞培养环境的干燥；
(5) 注意戴帽子和口罩；
(6) 尽可能使用一次性耗材及成品培养基。
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