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酶联免疫试剂盒酶结合物的常见问题及解决方法
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首先带大家了解如何正确使用酶结合物?
1.酶结合物的稀释液：
在稀释液中常加入高浓度的无关蛋白质(例如1%BSA或5%脱脂奶粉)，通过竞争抑制酶结合物在固相载体上的非特异性吸附。一般还加入能够抑制蛋白质吸附于塑料表面的非离子型表面活性剂，如吐温20(0.05%的浓度较为适宜)。
2.正确稀释酶结合物：
酶结合物的合适工作浓度需要通过预实验来确定，浓度过高易导致本底偏高，浓度过低则会导致阳性信号的减弱。
酶结合物最好在使用前稀释，稀释后的酶结合物不宜长期保存，因为低浓度的酶结合物极易失活。
酶联免疫试剂盒酶结合物的常见问题及解决方法：
| 问题 | 可能的原因 | 解决方法 |
| 阴性对照产生了阳性的结果 | 试剂或者耗材污染 | 更换试剂，使用一次性耗材 |
| 洗板出现问题 | 更换更强配方的洗涤液，增加洗板次数，延长洗板时间 | |
| 如果是在双抗体夹心法中出现，有可能是包被抗体与二抗间有交叉反应 | 更换包被抗体或二抗 | |
| 使用了过多的抗体 | 减少抗体使用量 | |
| 整板出现高背景 | 二抗产生了非特异性吸附 | 减少二抗使用量，缩短二抗反应时间 |
| 显色液不新鲜 | 使用现配的显色液 | |
| 显色反应时间过长没有终止 | 控制显色反应时间，及时终止反应 | |
| 试剂或者耗材污染 | 更换试剂，使用一次性耗材 | |
| 反应温度过高导致的非特异性吸附 | 严格控制反应在最适温度下进行 | |
| 封闭条件不佳导致的非特异性吸附 | 更换封闭能力更强的封闭液，延长封闭时间 | |
| 反应信号偏低 | 包被条件不合适 | 提高包板浓度，延长包板时间 |
| 抗原抗体反应不够充分 | 延长反应时间，确保反应在最适温度下进行 | |
| 显色液配方不恰当 | 增加显色底物的量 | |
| 二抗结合不够 | 提高二抗浓度，延长反应时间，更换效果更好的二抗 | |
| 梯度稀释做ELISA 时产生跳孔现象 | 酶标板叠放导致传热不均匀，各孔反应温度有差异 | 尽量避免酶标板叠放在一起 |
| 移液器稀释时未能保持连续性 | 定期校准移液器，确保移液器的正确使用 | |
| 反应溶液蒸发 | 酶标板用封条密封或者加盖 | |
| 洗板不均匀 | 确定洗板机能够正常工作 | |
| 酶标板底有杂物或者水珠 | 读板时清理干净酶标板底部 |
原创作者：上海沪鼎生物科技有限公司
