EDTA脱钙液

在组织切片过程中，一些组织内含有骨质或钙化灶时，含钙的组织不宜直接用石蜡包埋

切片。这是因为钙和石蜡之间的密度不同，较难切出完整的切片。对含钙组织最好固定之后，

再进行脱钙或二者同时进行。然后进行下游操作如脱水、透明、浸蜡、包埋、切片。用于脱

钙的试剂很多，脱钙剂包括有机酸、无机酸、乙二胺四乙酸(EDTA)以及电解法脱钙。EDTA

是一种相对较好的螯合脱钙剂，对组织结构影响最小，可以较好的保存组织的某些酶类，经

EDTA 脱钙后的组织可以进行免疫组化和原位杂交染色，但是该法脱钙速度太慢，一般脱需

要数周至数月。

EDTA脱钙液主要由EDTA、磷酸盐等组成，pH 值为 7.2。其优点是：①经

EDTA 脱钙的组织染色结果好；②对组织的结构损害小。其缺点是：①脱钙速度很慢，不适

合常规标本脱钙使用；②脱钙后组织会稍微变硬；③不宜用化学方法确定脱钙终点。
自备材料：

1、 PBS

2、 蒸馏水

3、 加热装置或微波炉
操作步骤(仅供参考)：

1、骨组织脱钙时，取材不易过厚，一般大约 5mm。

2、组织固定后，用 PBS 清洗 3 次，每次 20min。

3、组织用蒸馏水洗清洗 3 次，每次 20min。

4、 组织转移至 20~30 倍体积的 EDTA 脱钙液中，脱钙 10～30 天或更长时间。如果想加

快脱钙速度，可以置于 37℃进行脱钙。如果必要，更换新的 EDTA 脱钙液继续脱钙，

多数组织脱钙 2 周～3 个月即可，每周更换一次直至终点。亦可采用微波快速脱钙法：

微波炉设在 200W 左右的档位，每次加热 5min，依据组织厚度和密度重复 3～5min，

中间间隔 3～5min。

5、用蒸馏水冲洗数次。

6、常规脱水、包埋。
注意事项：

1、 厚度 5mm 的骨组织块脱钙时间一般脱钙 10~30 天即可，大多数在 14～60 天即可。

2、 适当加温能加快脱钙的速度，一般不应超过 37～40℃，温度过高容易使骨组织造成松

散解体，尤其不可大于 60℃。

3、 脱钙应彻底，防止脱钙不足或过度。脱钙程度应控制在不影响组织切片的同时尽量缩短

脱钙时间，以免脱钙过长引起组织损害。

4、 脱钙用具避免使用金属容器，尽量使用玻璃容器。

5、 骨组织脱钙应先固定后脱钙或脱钙固定同时进行，不应先脱钙后固定，以便减少组织的

损伤程度。

6、 每隔一段时间检测一次脱钙程度，脱钙过度会增加组织的损伤程度，影响染色结果。

7、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

有效期： 12 个月有效。

附录：

脱钙终点的测定(物理法)：采用针刺、手掐、钳夹等方法，当骨组织变软或针刺时没有阻力

感即可终止脱钙。物理检测法会对组织结构有一定的损害， 尽量避免用力过大或反复检测。

原创作者：青岛捷世康生物科技有限公司