土壤碱性磷酸酶（soil alkaline phosphatase，S-AKP/ALP）活性测定试剂盒说明书

注意：正式测定之前选择 2-3 个预期差异大的样本做预测定。

测定意义：

土壤磷酸酶是一类催化土壤有机磷化合物矿化的酶，其活性的高低直接影响着土壤中有机磷

的分解转化及其生物有效性，是评价土壤磷素生物转化方向与强度的指标。土壤磷酸酶受到

土壤碳、氮含量、有效磷含量和 pH 显著影响。通常按照其最适 pH 范围，分为碱性、中性

和酸性三种类型磷酸酶。

测定原理：

碱性环境中，S-AKP/ALP 催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二钠，通过测定酚的生成

量即可计算出 S-AKP/ALP 活性。

自备仪器和用品：

可见分光光度计、台式离心机、37℃恒温培养箱、分析天平、可调式移液器、1mL 玻璃比

色皿、冰、蒸馏水、无水乙醇和甲苯。

试剂组成和配制：

试剂一：液体×1 瓶，4℃避光保存。

试剂二：粉剂×1 瓶，4℃保存。用前加 50mL 蒸馏水充分溶解。

试剂三：液体×1 瓶，4℃保存。

试剂四：粉剂×1 瓶，4℃避光保存。临用前加 1152μL 无水乙醇（自备），48 μL 蒸馏水充分

溶解。（变褐色后不能再使用）

标准品：液体×1 瓶，0.5μmol/mL 苯酚标准液，4℃保存。

催化反应：

称取风干混匀土壤约 0.1g，加入 50μL 甲苯（自备），轻摇 15min；加 400μL 试剂一并且摇

匀后，置于 37℃恒温培养箱，开始计时，催化反应 24h；到时后迅速加入 1mL 试剂二充分

混匀，以终止酶催化的反应。8000g，25℃离心 10min，取上清液置于冰上待测。

显色反应：

1. 分光光度计预热 30 min，调节波长到 660 nm，蒸馏水调零。

2. 空白管：取 1mL 玻璃比色皿，加入 50 μL 蒸馏水，100 μL 试剂三，20 μL 试剂四，充分

混匀，显色后再加蒸馏水 830 μL，混匀后 25℃静置 30 min，于 660 nm 测定吸光度，记为 A

空白管。

3. 标准管：取 1mL 玻璃比色皿，加入 50 μL 标准液，100 μL 试剂三，20 μL 试剂四，充分

混匀，显色后再加蒸馏水 830 μL，混匀后 25℃静置 30 min，于 660 nm 测定吸光度，记为 A

标准管。

4. 测定管：取 1mL 玻璃比色皿，加入 50 μL 上清液，100 μL 试剂三，20 μL 试剂四，充分

混匀，显色后再加蒸馏水 830 μL，混匀后 25℃静置 30 min，于 660 nm 测定吸光度，记为 A

测定管。

注意：空白管和标准管只需测定一次。

S-ALP 活性计算公式：

活性单位定义：37℃中每克土壤每天释放 1μmol 酚为 1 个酶活单位。

S-AKP/ALP（μmol/d/g 土样）=[C 标准液×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)]×V

总÷W÷T

= 0.725×(A 测定管－A 空白管)÷(A 标准管－A 空白管)÷W

C 标准液：0.5μmol/mL；V 总：催化体系总体积，1.45mL；W：土壤样品质量，g；T：催

化反应时间，24 h=1 d

原创作者：青岛捷世康生物科技有限公司