动物细胞/组织细胞核粗提分离试剂盒产品说明书

动物细胞/组织细胞核粗提分离试剂是一种旨在从动物细胞或组织中分离出完整而纯化的细胞核细胞器的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于动物组织和培养细胞的细胞核的制备。其制备物产量高，可以被用于后续EMSA、体外转录反应、核转录终止（run-off）实验、转录图谱分析（profiling）、体外核凋亡检测、以及核染色质、基因组DNA、核RNA/RNP、组蛋白的纯化等实验。产品不含污染性蛋白酶和核酶，即到即用，性能稳定。

技术背景

细胞核是细胞中最大的细胞器，细胞核的分离是现代细胞生物学研究的最常用的手段之一。细胞核结构和功能的研究，包括细胞核的系列活动、染色质结构、基因表达的转录调节、RNA合成和操作、核双向转运的调节机制、核凋亡等。从任何组织或细胞分离细胞核的技术方法基本上采用：第一，通过机械或温和低渗化学方法破裂细胞；第二，通过低速差速离心获得粗提细胞核；第三，通过等密度离心获得高纯度的细胞核，去除所有细胞浆成分，例如微粒体、线粒体、神经髓鞘成分，尤其是与核膜相连的粗面内质网。

产品内容

清理液（Reagent A） 120毫升

裂解液（Reagent B） 50毫升

保存液（Reagent C） 5毫升

产品说明书1份

保存方式

保存裂解液（Reagent B）和保存液（Reagent C）在－20℃冰箱里，避免反复冻融；其余的保存在4℃冰箱里；裂解液（Reagent B）和保存液（Reagent ）严格无菌操作；有效保证6月

用户自备

HANK平衡盐缓冲溶液（GMS12028）或PBS缓冲溶液（GMS12033）：用于清理细胞

胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液（GMS12024）：用于细胞脱离

完全细胞培养液（GMS12052）：用于中和胰蛋白酶的细胞培养基

15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

50毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

1.5毫升离心管：用于样品操作的容器

4℃台式离心机：用于样品操作

DOUNCE匀浆器：用于裂解组织和细胞

实验步骤

一、动物组织细胞核分离

1． 手术取出动物组织，并秤重以确定1克组织重量

2． （选择步骤）放进预冷的50毫升锥形离心管

3． （选择步骤）加入适量的（1克组织需要5毫升）清理液（Reagent A）清洗1次

1． 移入到一个液氮冻存管

2． 即刻放入液氮罐过夜

4． 次日从液氮罐里取出，即刻（最快速度）碾碎组织成粉末（注意：切莫使组织冻融）

5． 转移到一个预冷的15毫升锥形离心管

6． 加入预冷的5毫升裂解液（Reagent B）

7． 涡旋震荡5秒，充分混匀

8． 置于冰槽里孵育10分钟

9． 即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器

10． 在冰槽里用匀浆棒匀化组织（约20下）（注意：参见注意事项6）

11． 将所有组织匀浆物移入15毫升锥形离心管

12． 放进4℃台式离心机离心15分钟，速度为500g

13． 小心抽去上清液

14． 加入200微升预冷的保存液（Reagent C），混匀沉淀颗粒

15． 即刻移入到预冷的1.5毫升离心管

16． 放进－70℃冰箱里保存

二、动物细胞细胞核分离

1． 准备5至10瓶75cm²细胞培养瓶的细胞（5 X 10⁷），直至细胞生长铺满整个培养表面

2． 分别加入10毫升用户自备的HANK平衡盐缓冲溶液或PBS缓冲溶液到每个细胞培养瓶，覆盖培养瓶表面，然后抽去

3． 重复实验步骤2一次

4． 加入3毫升用户自备的胰蛋白酶乙二胺四乙酸混合液，铺满整个培养平面

5． 置入37℃培养箱3分种

6． 轻轻手击震动培养瓶，使细胞脱落

7． 分别加入10毫升用户自备的完全细胞培养液

8． 移入一个50毫升锥形离心管

9． 放入台式离心机离心10分钟，速度为200g

10． 小心抽去上清液

11． 加入10毫升预冷的清理液（Reagent A），混匀细胞

12． 放入台式离心机离心10分钟，速度为300g

13． 小心抽去上清液

14． 加入预冷的5毫升裂解液（Reagent B）

15． 涡旋震荡5秒，充分混匀

16． 置于冰槽里孵育10分钟

17． 即刻放入预冷的DOUNCE匀浆器

18． 在冰槽里用匀浆棒匀化细胞（约20下）（注意：参见注意事项6）

19． 将所有细胞匀浆物移入15毫升锥形离心管

1． 放进4℃台式离心机离心15分钟，速度为500g

2． 小心抽去上清液

3． 加入200微升预冷的保存液（Reagent C），混匀沉淀颗粒

4． 即刻移入到预冷的1.5毫升离心管

5． 放进－70℃冰箱里保存

注意事项

1． 本产品为10次操作（1克动物组织或5 X 10⁷细胞）

2． 所有操作均须在4℃或以下状态进行

3． 操作时，避免污染母液，尤其是裂解液（Reagent B）和保存液（Reagent C）

4． 建议使用足够的组织或细胞量

5． 建议严格控制操作时间

6． 通常匀化次数为20下（或细胞颗粒群/组织块状消失为止）达到80％的细胞裂解为理想状态，但不同的组织或细胞类型会存在差异。用户可以使用台酚蓝染色，通过显微镜观察3微升匀浆物，观察细胞裂解程度和计量细胞核（注意：建议使用纯化细胞核台酚蓝染色试剂盒——GMS10448）

7． 通常1克动物组织或5 X 10⁷细胞的细胞核得率为50%以上（细胞核计数）

8． 如果需要获得99％以上纯度的细胞核，建议使用动物细胞/组织细胞核高纯超离分离试剂盒－GMS10100.3

9． 本公司提供系列细胞核分析试剂产品

质量标准

1． 本产品经鉴定性能稳定

2． 本产品经鉴定分离的细胞核完整

3． 本产品经鉴定分离的细胞核维持正常活性

4． 本产品经鉴定不含污染性蛋白酶和核酶

原创作者：青岛捷世康生物科技有限公司