过氧化氢酶（Catalase，CAT）试剂盒说明书

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定

测定意义：

CAT(EC 1.11.1.6)广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，是最主要的H₂O₂ 清除酶，

在活性氧清除系统中具有重要作用。

测定原理：

H₂O₂ 在 240nm 下有特征吸收峰，C AT 能够分解 H₂O₂，使反应溶液 240nm 下的吸光度随反

应时间而下降，根据吸光度的变化率可计算出C AT 活性。

需自备的仪器和用品：

紫外分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板（UV 板）、

研钵、冰和蒸馏水

试剂组成和配制：

提取液：液体100mL×1 瓶，4℃保存；

工作液：液体24mL×1 瓶，4℃保存；

粗酶液提取：

1、细菌、细胞或组织样品的制备：

细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量

（10⁴ 个）：提取液体积（mL）为500~1000：1 的比例（建议500 万细菌或细胞加入1mL 提

取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30 次 ）；

8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10 的比例（建议称取约0.1g 组织，

加入1mL 提取液），进行冰浴匀浆。8000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。

2、血清（浆）样品：直接检测。

测定步骤：

1、 分光光度计或酶标仪预热30min 以上，调节波长至240nm，蒸馏水调零。

2、 测定前将C AT 检测工作液在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）水浴10min 以上。

3、准备96 孔UV 板一块（非普通酶标板，普通酶标板只能透过可见光，不能透过紫外光，

检测波长小于340nm 务必使用UV 板 ）。

4、 在微量石英比色皿或96 孔UV 板中加入10μL 样本和190μL 工作液，混匀，记录240nm

下初始吸光值A1 和1min 后的吸光值A2。计算ΔA＝A1-A2。

注意事项：出现负值怎么办？

首先检查吸光值是否超过3，如果超过3 很可能是没有用UV 板，请换用UV 板。如果

未超过3，仍然出现负值则检查反应过程是否产生气泡，气泡多说明酶活性太高，气泡影响

产生了负值，可以将样本用提取液稀释10 倍后再检测。如果稀释样本或反应体系没有产生

气泡仍然出现较小的负值，说明该样本测不到该酶活。

CAT 活性计算：

a.用微量石英比色皿测定的计算公式如下

1、血清（浆）C AT 活力的计算:

单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化1nmol H₂O₂ 降解定义为一个酶活力单位。CAT(nmol/min/mL)= [ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷V 样÷T=459×ΔA

2、组织、细菌或细胞中C AT 活力计算：

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟催化1nmol H₂O₂ 降解定义为一个酶活力单位。CAT(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr) ÷T=459×ΔA÷Cpr

（2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每g 组织每分钟催化1nmol H₂O₂ 降解定义为一个酶活力单位。 CAT(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(W× V 样÷V 样总)÷T=459×ΔA÷W

（3） 按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每1 万个细菌或细胞每分钟催化1nmol H₂O₂ 降解定义为一个酶活力单位。CAT(nmol/min/10⁴ cell)＝[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷（500×V 样÷V 样总）÷T =0.917×ΔAV 反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；ε：H₂O₂ 摩尔消光系数，4.36×10⁴ L / mol /cm；d：比 色皿光径，1cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T：反 应时间，1 min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；500：细胞或细菌总数，

500 万。

b.用 96 孔板测定的计算公式如下

1、血清（浆）C AT 活力的计算:

单位的定义：每毫升血清（浆）每分钟催化1nmol H₂O₂ 降解定义为一个酶活力单位。CAT(nmol/min/mL)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷V 样÷T=918×ΔA

2、组织、细菌或细胞中C AT 活力计算：

（1）按样本蛋白浓度计算：

单位的定义：每mg 组织蛋白每分钟催化1nmol H₂O₂ 降解定义为一个酶活力单位。CAT(nmol/min/mg prot)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷(V 样×Cpr) ÷T =918×ΔA÷Cpr （2）按样本鲜重计算：

单位的定义：每g 组织每分钟催化1nmol H₂O₂ 降解定义为一个酶活力单位。 CAT(nmol/min/g 鲜重)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷（W× V 样÷V 样总）÷T=918×ΔA÷W

（3） 按细菌或细胞密度计算：

单位的定义：每1 万个细菌或细胞每分钟催化1nmol H₂O₂ 降解定义为一个酶活力单位。CAT(nmol/min/10⁴ cell)=[ΔA×V 反总÷（ε×d）×10⁹]÷（500×V 样÷V 样总）÷T=1.836×ΔAV 反总：反应体系总体积，2×10^-4 L；ε：H₂O₂ 摩尔消光系数，4.36×10⁴ L / mol /cm；d：96 孔板光径，0.5cm；V 样：加入样本体积，0.01 mL；V 样总：加入提取液体积，1 mL；T： 反应时间，1 min；W：样本质量，g；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；500：细胞或细菌总 数，500 万。

原创作者：青岛捷世康生物科技有限公司