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β-1,3 葡聚糖酶试剂盒说明书
点击次数：177 发布时间：2016/10/24 8:53:16
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王**
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β-1,3 葡聚糖酶（β-1,3-glucanase，β-1,3-GA）试剂盒说明书
分光光度法 50 管/24 样
测定意义：
β-1,3-GA( EC 3.2.1.73)主要存在植物中，催化 β-1,3-葡萄糖苷键水解。在植物染病或处于其他逆境条件下，可诱导细胞大量合成 β-1,3-GA，因此 β-1,3-GA 活性测定广泛应用于植物病理和逆境生理研究。
测定原理：
β-1,3-GA 水解昆布多糖，内切 β-1,3-葡萄糖苷键，产生还原末端，通过测定还原糖生成速率来计算其酶活性。
自备仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
试剂组成和配制：
提取液：液体 50mL×1 瓶，4℃保存；试剂一：粉剂×1 瓶，4℃保存；临用前加入 3mL 蒸馏水，充分溶解待用；试剂二：液体 30mL×1 瓶，4℃保存；
粗酶液提取：
按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为 1：5~10 的比例（建议称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液），进行冰浴匀浆。12000g 4℃离心 10min，取上清，置冰上待测。
测定步骤：
1、 分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 550nm，蒸馏水调零。
2、样本测定（在 1.5mL EP 管中依次加入下列试剂）：
| 试剂名称（μL） | 测定管 | | 对照管 | |
| 样本 | 100 | | | 100 |
| 蒸馏水 | | | | 100 |
| 试剂一 | 100 | | | |
| | 充分混匀，放入 37℃水浴 60 min | | ||
| 试剂二 | 600 | | | 600 |
| | | | | |
充分混匀，沸水浴 5min（盖紧，防止水分散失），流水冷却，550nm 处记录各管吸光值 A，如果吸光值大于 2，可以用蒸馏水稀释后测定（计算公式乘以相应稀释倍数），ΔA=A 测定-A对照。每个测定管需设一个对照管。
β-1,3-GA 活性计算：
标准条件下测定回归方程为 y = 0.0958x -0.0192；x 为标准品浓度（mg/mL），y 为吸光值。（1） 按蛋白浓度计算单位的定义：每 mg 组织蛋白每小时产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA(U/mg prot)=[( ΔA +0.0192)÷0.0958×V1]÷(V1×Cpr)=10.438×(ΔA +0.0192) ÷Cpr
(2) 按样本鲜重计算
单位的定义：每 g 组织每小时产生 1mg 还原糖定义为一个酶活性单位。
β-1,3-GA(U /g 鲜重)=[( ΔA +0.0192)÷0.09585×V1]÷(W×V1÷V2)=10.438×(ΔA +0.0192) ÷W
V1：加入反应体系中样本体积，0.1mL；V2：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g。
原创作者：青岛捷世康生物科技有限公司
