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H2S含量测定试剂盒说明书
点击次数：235 发布时间：2016/9/5 8:38:40
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H2S含量测定试剂盒说明书
(分光光度法 50T/48S)
测定意义
H2S 是一种新型气态信 分子，存在于脑内的神 递质，生理浓度的 H2S 对神 系统海马的长时程增强 能 有重要的调节作用，并对自发性高血压 出血性休克及肝 化等疾病的过程发挥着重要的病理生理效应
测定原理
H2S 与醋酸锌 N, N-二甲基对苯二胺和 酸铁铵等反应生成亚甲基蓝，亚甲基蓝在 665nm处有最大吸收峰，通过测定其吸光值可计算H2S含量。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、可见分光光度计、1m玻璃比色皿、蒸馏水。
试剂组成和配制
提取液 液体 50mL×1 瓶，4℃保存
试剂一 液体 25mL×1 瓶，4℃保存
试剂二 液体 15mL×1 瓶，4℃保存
试剂三 液体 15mL×1 瓶，4℃避光保存
试剂四 液体 15mL×1 瓶，4℃保存
试剂五 液体 3mL×1 瓶，4℃避光保存
样品处理
1、组织：按照组织质量（g）：提取液体积（mL）为：1:5～10的比列（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液）进行水浴匀浆，然后12000rpm，4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、细菌、真菌：按照细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500～1000:1的比列（建议500万细胞加入1mL提取液），水浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；然后12000rpm，4℃，离心10min，取上清置于冰上待测。
3、血清（浆）：直接测定
操作表（取1.5mL离心管，按照下表操作）
| | 空白管 | 测定管 |
| 样品（mL） | | 0.25 |
| H2O（mL） | 0.25 | |
| 试剂一（mL） | 0.25 | 0.25 |
| 充分振荡混匀 | ||
| 试剂二（mL） | 0.25 | 0.25 |
| 12000rpm，4℃，离心10min，去上清，留沉淀 | ||
| H2O（mL） | 0.5 | 0.5 |
| 12000rpm，4℃，离心10min，去上清，留沉淀 | ||
| 试剂一（mL） | 0.25 | 0.25 |
| 试剂三（mL） | 0.25 | 0.25 |
| 充分振荡混匀 | ||
| 试剂四（mL） | 0.25 | 0.25 |
| 12000rpm，4℃，离心10min，取上清 | ||
| 试剂五（mL） | 0.05 | 0.05 |
| 混匀，室温静置20min，1mL玻璃比色皿，空白管调零，测定A665 | ||
H2S计算
1、标准曲线回归方程为：y=0.0044x，R2=0.9988
2、计算公式
（1）、组织样品
a.按照蛋白浓度计算
H2S（umol/mg prot）=A665/0.0044×V反总÷（V样×Cpr）×10-3=0.727×A665÷Cpr
b.按照样本重量计算
H2S（umol/g）=A665/0.0044×V反总÷（V样×Cpr）×10-3=0.727×A665÷Cpr
（2）、液体样品
H2S（umol/L）=A665/0.0044×V反总÷V样=727×A665
（3）、细胞
H2S（umol/104cell）-A665/0.0044×V反总÷（V样÷V样总×细胞数量（万个）×10-30=0.727×A665÷细胞数量万个。
V反总：反应总体积0.8mL:V样：反应中样品体积，0.25mL：V样总：加入提取液体积1mL：w：样品质量，g：Cpr：蛋白浓度，mg/ML
原创作者：青岛捷世康生物科技有限公司
