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实体肿瘤组织单细胞核（裸核）悬液样品的制备
点击次数：327 发布时间：2016/8/10 8:41:18
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实体肿瘤组织单细胞核（裸核）悬液样品的制备
从新鲜实体瘤组织中直接脱核的方法，是采用一种低渗组织液，造成细胞膜破裂，自行释放细胞裸核进入悬液。本方法的优点是方法简单、易掌握，并可改善样品的变异系数（CV值）。裸核样品的流式分析，仅适用于细胞核DNA含量测量和DNA细胞周期的分析研究。由于细胞膜遭到破坏，引起胞浆的流失，因此不适用于细胞内蛋白质、RNA、酶和酶代谢产物的定量分析，更不适用于细胞膜表面抗原抗体和受体方面的研究。下面介绍一种染色-去污剂溶液（Stain-Detergent Solution）制备裸核悬液的方法。
染色-去污剂溶液的配制 溴化乙啶（EB）10mg，枸椽酸钠1.0g，NaCI564mg，蒸馏水1000ml，非离子去污剂NP-40（标准浓度0.03%）或Triton-X-100 1.0%。
Tris缓冲液：Tris 12.1g，EDTA二钠盐370mg，蒸馏水920ml，HCI（IN）80ml（分析纯），pH7.4。
制备过程1、组织处理，取新鲜肿瘤组织0.5g，用锐剪刀剪碎成1.0mm3组织块，放入10ml试管中。2、立即加入Tris缓冲液5ml，漂洗组织一次，弃去上清。3、加入染色去污剂10ml，放入4℃冰箱12小时左右，间隔2小时振荡一次。4、以50um尼龙网过滤，离心沉淀，既得单分散的裸核悬液。
原创作者：青岛捷世康生物科技有限公司
