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测量细胞突变作用
点击次数：335 发布时间：2016/8/3 8:34:55
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测量细胞突变作用
近20年来，人们越来越重视由于化合物进入环境给人们带来的遗传危害。对于化合物的致突作用，国外学者已做了大量测试工作，大致包括三个方面的：1、用原核细胞实验，主要是用沙门氏菌属；2、体外哺乳动物细胞实验，包括小鼠、金黄地鼠胚胎细胞，C3H10T1/2细胞系，3T3细胞系，人成纤维细胞等；3、动物试验，主要有小鼠、黄金地鼠、果蝇等。不同种属的动物或来源于不同种属动物的细胞（系）对化合物的反应不一，不能用来自上述三个方面的实验结果，不加分析地外推到人的遗传危害性。
近年来，人们不断努力建立新的测试技术来提高测试的灵敏度、速度，并多采用真核细胞，特别是来自人体的细胞测试各种化合物的致突作用
对致突作用测测定
对变异细胞的最常用的标记方法是用抗体与特殊变异细胞表面抗原相结合。如用抗小鼠免疫球蛋白同型抗原的特殊抗体标记存活的杂交瘤细胞，以显示变异的产生同型抗原细胞的存在。有8类免疫球蛋白同型抗原，即IgM、IgD、IgG3、IgG1、IgG2a、IgG2b、IgE和IgA。
基因扩增
用流式细胞分选计，对体外培养的细胞能有效地观察基因扩增的发生。并进一步用于基因位点的观察。如Kavathas等人用基因扩增技术研究鼠-人杂交细胞，显示人T淋巴细胞分化抗原—Leu-2出现高水平。用荧光标记的单克隆抗—Leu-2对培养的杂交细胞群染色，则明显标记的细胞被分选出来，经培养、再标记、再分选、反复6次，则染色的细胞亮度为原来的40倍，细胞DNA在Leu-2方面转化比其他细胞提高20倍，细胞含人DNA序列比原来细胞高50倍。故应用流式分选法，在杂交细胞系内发现Leu-2基因扩增。
用上述方法可分选出含有扩增了的癌基因细胞。对于标记的细胞群。如应用灵敏的荧光多聚核苷酸探针时，就能探测出含有扩增癌基因核组型的细胞亚群。
致丝裂性的测定
微核的测定代表筛选丝裂剂（染色体断裂）的方法。由于小鼠外周血红细胞的微核细胞率低和计数的细胞数有限，常得不到具有统计学意义的结果。最近，用流式细胞计能自动测小鼠微核细胞。用特异性DNA荧光团染色，即DAPI和SR101，用两个参数识别，红细胞呈SR101荧光和微核呈DNA的DAPI荧光。
次黄嘌呤鸟嘌呤糖基转移酶（HGPRT）
HGPRT基因位于X性染色体上。体细胞单一突变可使此酶功能完全丧失。在有6-硫代鸟嘌呤（TG）存在时，突变细胞能抗TG对它的抑制作用，能继续合成DNA、增殖，成为TGR变异细胞株。
血色蛋白变异株
典型的例子是镰刀形红细胞，它含有变异血红蛋白（血红蛋白S）。在正常人，这种变异的细胞仅占1—10×10-8.要测出这样少的变异细胞，就要提高细胞悬液浓度，如5×108细胞/ml，并提高细胞浏览率，如1—2×106细胞/秒，这样可在20分钟内测完109细胞。
血型蛋白A变异株
此变异株是人红细胞表面有血型糖蛋白A（GPA），它携带有抗原，决定M及N血组。它们的等位基因都位于第4号染色体上。只与GPA两个等位基因型中的1个结合的单一特异性抗体已分离出来，再用不同颜色的荧光团标记这些抗体，并与来自杂合细胞的血液培养。可用流式细胞术测量变异细胞的2个参数，这些细胞将失去2个等位基因型中的1个，但表达出另1个。在受电离辐射照射者中，曾见到更持久性的效应。在广岛原爆幸存者中，其变异红细胞率与在1945年受照剂量有关。至今已40多年仍存在着骨髓造血干细胞GPA位点上的突变，并仍在产生变异的子代细胞。
原创作者：青岛捷世康生物科技有限公司
