小檗、黄连和黄柏中黄连素的含量测定

仪器、色谱仪：高效液相色谱仪，带可变波长流通检测器；柱：4x200mm不锈钢柱，湿式充填青岛海洋化工厂硅胶（5um）；检测器波长：254nm；流动相：甲醇-浓氨水-1N（27:0.05:0.5V/V，流动相流速：1.0ml/min，记录器和纸速：056型记录器，2.5mm/min，供试品进样方法和体积：停留进样，每次0.5-1.0ul。

试剂：盐酸黄连素：提取品经水重结晶后，按中国药典方法定量合格，做对照品；巴马亭、药根碱、小檗胺：为单体； 小檗 （根）、黄连（根）和黄柏（皮）：由药材部门购得，磨成粗粉，过40目筛网；甲醇、氨水和（化学纯）。

实验方法与结果

1、标准曲线制备 精密称取100℃干燥的盐酸黄连素对照品适量，用甲醇溶解，取一定量进样，按进样量对峰高作图的一条通过原点的直线（如图 2-4）。

2、供试品的提取及测定 小檗 （或黄连、黄柏）粉末100-2000mg（视黄连素的含量而定，同时测定水分），精密称定后置脂肪提取器中，在80℃谁遇上加甲醇回流提取，直至回流液无色位置（约2h），浓缩甲醇液，移入25ml容量瓶中，提取瓶用甲醇洗涤3次，洗液并如容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，在4x满标吸光值和254nm波长检测，进样0.5-1.0ul，按峰高值查标准曲线，计算含量，结果见表2-17.

从表中可以看出，本法以甲醇做提取溶媒时，定量结果和药典规定的重量法相一致。

3、方法的重演性 在16x满标吸光值，检测波长244nm时，经10次进样，每次1.01ug盐酸黄连素，测其峰高为118.8±2.9mm，变异系数为2.4%。

4、实验条件探讨

（1）色谱条件：采用YWG-CH键合固定相（天津世纪二厂，10um和37-40un）和硅胶（青岛海洋化工厂 5um），分别做返现和正相色谱分离，发现使用返现固定相时，以甲醇-水（50:50V/V等）和乙腈-磷酸缓冲液做流动相，仅出1-2个峰；而使用硅胶做正相分离时，改进Banker等分离药物所用流动相的比例为甲醇-氨水-1N（27:0.05:0.5V/V),供试液出峰数增加，各组分能很好分离。黄连的甲醇提取液在254nm波长检测时，可出8个峰，以坚定为黄连素，巴马亭，药根碱和小檗胺等组分。

黄连素的检测波长，可采用254或350nm。本实验采用254nm，同其他波长相比，灵敏度较高，出峰数多。流动相流速的选择，从0.8-1.2ml/min，经比较认为1.0ml/min的流速为好（2）供试品中黄连素的提取条件：供试品提取溶媒的选择，提取方式及时间，赤田良信等曾做研究。本实验选用乙醇、甲醇和1%枸缘酸甲醇液提取溶媒，提取后进样定量，发现一甲醇为溶媒，采用回流提取较好。如果采用浸泡方式，宜用1%枸缘酸甲醇液浸泡过夜。

5、黄连素加量回收实验 黄连的甲醇提取液加适量对照液后测定，结果回收率为99.40%。

原创作者：青岛捷世康生物科技有限公司