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支原体染色检测试剂盒使用注意事项
点击次数：332 发布时间：2015/7/3 16:33:35
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王**
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支原体染色检测试剂盒
产品简介：
支原体染色检测试剂（Mycoplasma Stain Assay Kit）是一种经典的利用DNA荧光染色法检测支原体污染的试剂盒，其原理在于，当细胞发生凋亡时，染色质会固缩，Hoechst33258染色后在荧光显微镜下观察，正常细胞的细胞核呈正常的蓝色，而凋亡细胞的细胞核会呈致密浓染，或呈块状致密浓染，颜色有些发白。
Leagene Hoechst Staining Kit经常用于培养的铁壁或悬浮细胞以及组织切片的细胞凋亡检测。该试剂盒检测细胞含量范围一般为0.1~1x106之间。
产品组成：
| 名称/编号 | RY0285-100T | Storage |
| 试剂A：Hoechst固定液 | 50ml | RT |
| 试剂B：Hoechst染色液 | 50ml | -20℃ 避光 |
| 试剂C：荧光封片剂 | 5ml | 4℃ 避光 |
| 使用说明书 | 1份 | |
自备材料：
1、 可观察蓝光的荧光显微镜或激光共聚焦显微镜
2、 PBS或生理盐水
3、 载玻片、盖玻片
4、 预冷固定液：预冷的70%乙醇或4%多聚甲醛
操作步骤（仅供参考）：
（一）贴壁细胞
1、取洁净盖玻片在70%乙醇中浸泡5 分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用无菌的PBS或生理盐水洗涤3次，再用细胞培养液洗涤1次。将盖玻片置于6孔板或其他培养皿内，接种细胞培养过夜，使融合率约为50%~80%。
2、加入干预条件使细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入Hoechst固定液0.5ml,固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。
3、去除固定液，用PBS或生理盐水洗2次，每次3min，吸尽液体，洗涤时宜用摇床或手动晃动。
4、加入Hoechst 33258 染色液0.5ml，孵育5min。也宜用摇床，或手动晃动数次。
5、弃染色液，用PBS或生理盐水洗2次，每次3min，吸尽液体，洗涤时宜用摇床或手动晃动。
6、滴一滴抗荧封片剂于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，让细胞接触封片剂，尽量避免气泡。
7、荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长350nm 左右，发射波长460nm 左右。
（二）
（二）悬浮细胞
1 离心收集细胞样品于1.5ml离心管内弃液，加入Hoechst固定液0.5ml,缓缓悬起细胞,固定10min或更长时间（亦可4℃过夜）.
2 低速离心去除固定液,用PBS或生理盐水洗2次,每次3min,吸尽液体.洗涤时用手晃动数次.
3 低速离心离心后吸去大部分液体保留50ul液体,在缓缓悬起细胞,滴加至载玻片上,尽量使细胞分布均匀.
4 稍晾干,使细胞贴在载玻片上不易随液体流动.
5 均匀滴上Hoechst 33258 染色液0.5ml,孵育5分钟.用吸水纸从边缘吸去液体,微晾干.
6 弃染色液,用PBS或生理盐水洗2次,每次3min,吸尽液体.洗涤时宜用摇床,或手动晃动.
7 滴一滴抗荧光封片剂于载玻片上,盖上一清洁的盖玻片,尽量避免气泡.
8 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核.激发波长为350nm左右,发射波长为460nm左右.
（三）组织切片
1 常规包埋切片。
2 用PBS或生理盐水洗2次,每次3min.洗涤时手摇晃动数次。
3 均匀滴上Hoechst 33258染色液0.5ml,孵育5分钟。
4 弃染色液,用PBS或生理盐水洗2次.每次3min,吸尽液体.洗涤时宜用摇床,或手动晃动。
5 将切片置于载玻片上,滴一滴抗荧光封片剂,盖上一洁净的盖玻片,尽量避免气泡。
6 荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核.激发波长350nm左右，发射波长460nm左右。
注意事项:
1、荧光染料都存在淬灭的问题,建议染色后尽快检测,使用抗荧封片剂时也应避光操作。
2、在为了获得细胞沉淀的离心过程中,对于特殊细胞,如果细胞沉淀不充分,可以适当提高离心力或延长离心时间。
3 、Hoechst 33258染色液对人体有一定刺激性,请注意适当防护。
4、为了您的安全和健康,请穿实验服并带一次性手套操作。
有效期:
12个月有效。亦可4摄氏度保存,一个月有效。
原创作者：青岛捷世康生物科技有限公司
