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病毒的鸡胚培养
点击次数：242 发布时间：2015/10/20 15:33:19
一、目的要求
掌握鸡胚尿囊腔接种培养新城疫病毒的操作技术.
二、器材
1.鸡胚 应选用健康鸡群的受精蛋,接种鸡的鸡胚应无母源抗体,以免影响病毒在胚胎中的增殖.实验用的鸡胚多采用9—10日龄的活胚.
2.接种材料 新城疫I系疫苗
3.各种器械 孵卵器、照蛋箱、蛋架、打孔器、1ml结核菌素注射器、41/2号注射针头、镊子、3%碘酊、75%酒精棉球、铅笔、酒精灯、剪刀、眼科镊子、灭菌的疫苗瓶、灭菌滴管和固体石蜡等.
三、内容和方法
（一）接种前的准备
1.鸡胚的准备
本实验选择9—10日龄的鸡胚,在照蛋时以铅笔勾划出气室,于气室稍下方胚胎活跃而血管明显的区域中,在血管之间的间隙划上记号,作为接种部位；用0、 1%新洁尔灭把蛋壳搽洗干净并抹干,再以2%碘酊对接种部位进行消毒,用75%酒精再擦一遍,在接种定位出打孔,气室向上竖放于蛋架上.
2.病毒接种材料的准备
要分离培养的病毒材料应是无菌的,因此为达到材料无菌的目的,可在每ml接种物质中加青霉素和链霉素各100—500IU,置室温中1小时或冰箱中12—24小时处理.或经滤器除菌.
（二） 接种
绒毛尿囊腔内注射：用6号针头的1ml注射器吸取新城疫病毒材料,针头从已打好的小孔中向鸡胚方向插入0.5—1cm,注入0.1ml （相当0、5羽份）,再加氧化锌胶布贴封,再加融化的固体石蜡封口,放回孵化箱中进行孵化,每天翻蛋两次,照视一次.24小时内死亡的舍去.
（三）收获
新城疫I系病毒材料,在接种24—48小时即可收获.收获前应将鸡胚 置4度冰箱冷藏4小时或过夜,以免解剖时血管破裂.碘酒消毒蛋壳,用镊子去卵壳和尿囊膜,用吸头吸尿囊液于瓶内,可收集5-8ml,无菌检查,冰冻保存.
Nutrient Agar
脑-心浸萃液态培养基250g用于粪链球菌的增菌培养
Brain-Heart Baptist extraction liquid medium
KF链球菌琼脂100g用于链球菌的选择性分离及计数
KF Streptococcus Agar
大肠菌群显色培养基1000ml用于快速、准确检测大肠菌群培养24小时，显兰色
Coliform Chromogenic Medium
乳糖蛋白胨培养液250g用于大肠菌群，粪大肠菌群，大肠杆菌的测定(GB标准)
Lactose Peptone Broth
远藤琼脂(品红亚硫酸钠)培养基250g用于滤膜法大肠菌群检测(GB标准)
Endo Agar
亮绿乳糖胆盐培养液（BGB）250g用于大肠菌群的确证试验
Brilliant Green Lactose Bile Broth
硝酸盐还原试剂盒5ml*4用于硝酸盐还原试验
KF链球菌肉汤100g用于链球菌的选择性增菌培养
KF Streptococcus Broth
50%卵黄乳液5ml*10每支加入100mlHB0262
50% egg yolk emulsion
掌握鸡胚尿囊腔接种培养新城疫病毒的操作技术.
二、器材
1.鸡胚 应选用健康鸡群的受精蛋,接种鸡的鸡胚应无母源抗体,以免影响病毒在胚胎中的增殖.实验用的鸡胚多采用9—10日龄的活胚.
2.接种材料 新城疫I系疫苗
3.各种器械 孵卵器、照蛋箱、蛋架、打孔器、1ml结核菌素注射器、41/2号注射针头、镊子、3%碘酊、75%酒精棉球、铅笔、酒精灯、剪刀、眼科镊子、灭菌的疫苗瓶、灭菌滴管和固体石蜡等.
三、内容和方法
（一）接种前的准备
1.鸡胚的准备
本实验选择9—10日龄的鸡胚,在照蛋时以铅笔勾划出气室,于气室稍下方胚胎活跃而血管明显的区域中,在血管之间的间隙划上记号,作为接种部位；用0、 1%新洁尔灭把蛋壳搽洗干净并抹干,再以2%碘酊对接种部位进行消毒,用75%酒精再擦一遍,在接种定位出打孔,气室向上竖放于蛋架上.
2.病毒接种材料的准备
要分离培养的病毒材料应是无菌的,因此为达到材料无菌的目的,可在每ml接种物质中加青霉素和链霉素各100—500IU,置室温中1小时或冰箱中12—24小时处理.或经滤器除菌.
（二） 接种
绒毛尿囊腔内注射：用6号针头的1ml注射器吸取新城疫病毒材料,针头从已打好的小孔中向鸡胚方向插入0.5—1cm,注入0.1ml （相当0、5羽份）,再加氧化锌胶布贴封,再加融化的固体石蜡封口,放回孵化箱中进行孵化,每天翻蛋两次,照视一次.24小时内死亡的舍去.
（三）收获
新城疫I系病毒材料,在接种24—48小时即可收获.收获前应将鸡胚 置4度冰箱冷藏4小时或过夜,以免解剖时血管破裂.碘酒消毒蛋壳,用镊子去卵壳和尿囊膜,用吸头吸尿囊液于瓶内,可收集5-8ml,无菌检查,冰冻保存.
Nutrient Agar
脑-心浸萃液态培养基250g用于粪链球菌的增菌培养
Brain-Heart Baptist extraction liquid medium
KF链球菌琼脂100g用于链球菌的选择性分离及计数
KF Streptococcus Agar
大肠菌群显色培养基1000ml用于快速、准确检测大肠菌群培养24小时，显兰色
Coliform Chromogenic Medium
乳糖蛋白胨培养液250g用于大肠菌群，粪大肠菌群，大肠杆菌的测定(GB标准)
Lactose Peptone Broth
远藤琼脂(品红亚硫酸钠)培养基250g用于滤膜法大肠菌群检测(GB标准)
Endo Agar
亮绿乳糖胆盐培养液（BGB）250g用于大肠菌群的确证试验
Brilliant Green Lactose Bile Broth
硝酸盐还原试剂盒5ml*4用于硝酸盐还原试验
KF链球菌肉汤100g用于链球菌的选择性增菌培养
KF Streptococcus Broth
50%卵黄乳液5ml*10每支加入100mlHB0262
50% egg yolk emulsion
