联系我们
联系人：陈小姐
技术文章
传代培养细胞染色体显示法
点击次数：140 发布时间：2016/7/27 14:22:08
商家名片
陈**
联系我时，请说明是阿仪网看到的，谢谢!
- 电话: 02*******894
- 手机: 13******131
- 微信:
- 交换名片后展示联系方式 → →
1．培养细胞：取处于指数生长期、用较大瓶皿培养的、80％～90％汇合单层培养细胞。
2．加秋水仙素：使用最终浓度为0.02～0.8微克/毫升营养液，温箱继续培养6～10小时；或用低温封闭法：把培养细胞置于4℃条件下6～12小时后，再于37℃温箱继续培养6～10小时处理（加秋水仙素）。
3．采集分裂细胞：可利用分裂中期细胞体变圆与底物附着不牢特点，此时手持培养瓶，左右反复横向水平摇动，令培养液在培养细胞表面反复冲刷。应用此法可使90％的中期分裂细胞从瓶壁脱落，注意勿用力过猛，以防多量非分裂细胞脱落影响观察。
4．离心：收集培养液，1000转/分钟离心5～10分钟。
5．低渗处理：吸除上清液、加入预温至37℃的0.075M KCl溶液，在温箱中静置20～30分钟。
6．预固定：向悬液中加新鲜1：3醋酸、甲醇固定液1ml，用吸管吹打调匀，此措施能起到先使细胞表面轻微固定，可防止固定后细胞粘连成块。
7．固定：离心，同4，吸除上清液，加新鲜固定剂5～10ml；加固定剂时要用一手微斜持离心管，另手用吸管吸取固定剂，把固定剂逐滴滴在离心管壁上，使之慢慢流入离心管中，然后轻轻吹打均匀，置15～20分钟。
8．重复7，末次离心后，小心吸除大部分上清，据悬液中细胞密度大小，余下固定液0.5～1ml。
9．制片：用滴片法制片，按如下步骤：彻底洗净载物片，勿留任何油脂，置冰箱中储备备用。滴片前现从冰箱中取出冷载物片1片，在载物片表面出现细微水气时，立即向片的一侧滴2～3滴细胞悬液，滴片时的距离能保持半米高度才好。滴片后置室温中令其自然干燥，或用吹风机热风吹干亦可。如此制备好的标本可置盒中备用或立即进行染色观察。
10． 染色和封片：一般常用Giemsa染色：取干液Giemsa 1份加pH6.8磷酸缓冲液9份混合，染色10分钟后，水洗、晾干、可直接观察。如标本需要保存或做长时间观察，可过二甲苯两次后，用中性树胶封片后，再过二甲苯，然后封片亦可。
CD33CD33抗体
phospho-c-kit(Tyr936)磷酸化原癌基因c-kit抗体
phospho-c-Jun(Thr91+Thr93)磷酸化原癌基因c-Jun抗体
CLCN3氯离子通道蛋白3抗体
phospho-Cyclin E (Thr395)磷酸化周期素E抗体
Phospho-cdc25C (Ser216)磷酸化细胞分裂周期蛋白25C抗体
Phospho-CDK9 (Thr186)磷酸化周期素依赖性激酶9抗体
Phospho-Connexin 43 (Ser368)磷酸化Connexin 43蛋白抗体
cofilin丝切蛋白抗体
phospho-Cortactin (Tyr466)磷酸化皮层肌动蛋白抗体
Phospho-Cyclin B1 (Ser147)磷酸化周期素B1抗体
Phospho-Cyclin B1 (Ser133)磷酸化周期素B1抗体
原创作者：上海邦景实业有限公司
