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ELISA技术相关的这些知识知多少
点击次数:145 发布时间:2015/11/16 14:22:55
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陈**
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实验原理: 结合在固相载体表面的抗原或抗体与受检标本(抗原或抗体)起反应。用洗涤的方法洗去未结合的抗原或抗体。再加入酶标记的抗原或抗体,也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。elisa试剂盒
加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,根据呈色的深浅进行定性或定量分析。根据实际的应用方法,可以分成以下几种: 双抗夹心 ELISA:将捕获抗体包被在固相载体上,封闭后加入待检抗原,温育后加入酶标检测抗体,捕获抗体和检测抗体可以是针对不同表位的两种单抗,也可以是针对同一抗原的一种单抗与一种多抗,但是检测抗体需要经过酶标。 竞争ELISA:用待检抗原或抗体去干扰已经预先设计好的体系,最终显色的结果与待检抗原或抗体的干扰程度成负相关。主要应用于只有一个抗原表位的蛋白检测。elisa试剂盒 多因子ELISA检测技术:多重ELISA芯片技术通过在96孔板的每个孔中以阵列的形式植入1~25种捕获抗体,随后像ELISA一样操作,通过化学发光(HRP酶)和荧光燃料(红外)来检测。
elisa试剂盒受刺激的细胞产生的细胞因子是短暂的,并且不同细胞因子基因表达的动力学是变化的。通过ELISA实验只能检测到的免疫反应性的细胞因子蛋白的含量,而这并不能完全代表细胞因子的生物活性的水平。例如,使用抗细胞因子抗体的一种ELISA不能区别如TGF-β1的细胞因子蛋白是无活性的前体形式还是有活性的成熟蛋白。此外,一种ELISA可以检测部分降解的细胞因子蛋白,它们仍有免疫反应性(例如至少可识别两个表位),当时它可能却丧失了它们的生物学活性。
加入酶反应的底物后,底物被酶催化成为有色产物,产物的量与标本中受检物质的量直接相关,根据呈色的深浅进行定性或定量分析。根据实际的应用方法,可以分成以下几种: 双抗夹心 ELISA:将捕获抗体包被在固相载体上,封闭后加入待检抗原,温育后加入酶标检测抗体,捕获抗体和检测抗体可以是针对不同表位的两种单抗,也可以是针对同一抗原的一种单抗与一种多抗,但是检测抗体需要经过酶标。 竞争ELISA:用待检抗原或抗体去干扰已经预先设计好的体系,最终显色的结果与待检抗原或抗体的干扰程度成负相关。主要应用于只有一个抗原表位的蛋白检测。elisa试剂盒 多因子ELISA检测技术:多重ELISA芯片技术通过在96孔板的每个孔中以阵列的形式植入1~25种捕获抗体,随后像ELISA一样操作,通过化学发光(HRP酶)和荧光燃料(红外)来检测。
elisa试剂盒受刺激的细胞产生的细胞因子是短暂的,并且不同细胞因子基因表达的动力学是变化的。通过ELISA实验只能检测到的免疫反应性的细胞因子蛋白的含量,而这并不能完全代表细胞因子的生物活性的水平。例如,使用抗细胞因子抗体的一种ELISA不能区别如TGF-β1的细胞因子蛋白是无活性的前体形式还是有活性的成熟蛋白。此外,一种ELISA可以检测部分降解的细胞因子蛋白,它们仍有免疫反应性(例如至少可识别两个表位),当时它可能却丧失了它们的生物学活性。
原创作者:上海邦景实业有限公司



