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夹心法检测白介素8(IL-8)的详细要素
点击次数：1015 发布时间：2016/7/12 11:05:46
商家名片
钱**
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白细胞介素-8是趋化因子家族的一种细胞因子，在参与和调节人类生殖生理和病理过程的作用已得到肯定，其作用机制之一就是与其特异性受体结合而发挥作用。Il-8是一种分子量为8～10kD的多肽，对嗜中性粒细胞，T淋巴细胞、嗜硷性粒细胞具有趋化作用，并可激活嗜中性粒细胞，是一种重要的炎症介质。在严重感染病人的血清中、炎症局部渗出液中都可检测到高水平的IL-8.此外，近年来的研究表明，IL-8可能与各种组织缺血后再灌注损伤的发生有关。我们采用两株自制的单克隆抗体建立了夹心法ELISA用于检测IL-8，敏感性可达156Pg/ml，操作简单，重复性良好，可用于IL-8的基础和临床研究。
一、原理
采用两株识别不同表位的抗IL-8单克隆抗体，其中一株(4D7)作为包被抗体，以识别和结合待检标本中的IL-8,另一株作为酶标抗体，与结合于包被抗体的IL-8的另一个表位结合并催化底物显色。
二、试剂器材
1. 试剂盒提供包被抗体、酶标抗体、标准品，底物(ABTS)、96孔ELISA板。
2. 包被缓冲液、PBS、底物缓冲液配制同常规ELISA法。
三、操作步骤
1. 包被：pH9.5 碳酸盐缓液稀释4D7单克隆抗体粗提γ球蛋白至1μg/ml,加入96孔板，100μl/孔，放4℃，36小时。
2. 封闭：0.1％吐温PBS(Buffer A)冲洗96孔板三次，加3％BSA Buffer A(Buffer B)200μl/孔，放37℃，1小时。
3. 加待检样品：Buffer A 冲洗96孔板三次，加待检样品及Buffer B 稀释的标准品100μl/孔，放37℃，3小时。
4. 加酶标抗体：Buffer A冲洗96孔板五次，3％PEG Buffer A稀释酶标抗体至1∶800，加入96孔板，100μl/孔，放37℃，1小时。
5. 显色：Buffer A冲洗96孔板五次，pH5.4柠檬酸缓冲液溶解底物(ABTS)，0.2mg/ml,加3％H2O2,2μl/ml，加入96孔板，100μ/孔，室温下或37℃显色。
四、注意事项
1. 待检标本如为血清，应采用一次性容器，血液采集后尽快(6小时以内)分离血清。
2. 封闭液或抗体稀释液应新鲜配制或冻存。
凡购买我司白介素elisa试剂盒http://www.tsz168.com/Products/，可全国各地快递免费包邮（偏远地区请特别注明运输方式），亦可根据客户需求，选择相应的运输方式，上海地区免费上门取样啦。
一、原理
采用两株识别不同表位的抗IL-8单克隆抗体，其中一株(4D7)作为包被抗体，以识别和结合待检标本中的IL-8,另一株作为酶标抗体，与结合于包被抗体的IL-8的另一个表位结合并催化底物显色。
二、试剂器材
1. 试剂盒提供包被抗体、酶标抗体、标准品，底物(ABTS)、96孔ELISA板。
2. 包被缓冲液、PBS、底物缓冲液配制同常规ELISA法。
三、操作步骤
1. 包被：pH9.5 碳酸盐缓液稀释4D7单克隆抗体粗提γ球蛋白至1μg/ml,加入96孔板，100μl/孔，放4℃，36小时。
2. 封闭：0.1％吐温PBS(Buffer A)冲洗96孔板三次，加3％BSA Buffer A(Buffer B)200μl/孔，放37℃，1小时。
3. 加待检样品：Buffer A 冲洗96孔板三次，加待检样品及Buffer B 稀释的标准品100μl/孔，放37℃，3小时。
4. 加酶标抗体：Buffer A冲洗96孔板五次，3％PEG Buffer A稀释酶标抗体至1∶800，加入96孔板，100μl/孔，放37℃，1小时。
5. 显色：Buffer A冲洗96孔板五次，pH5.4柠檬酸缓冲液溶解底物(ABTS)，0.2mg/ml,加3％H2O2,2μl/ml，加入96孔板，100μ/孔，室温下或37℃显色。
四、注意事项
1. 待检标本如为血清，应采用一次性容器，血液采集后尽快(6小时以内)分离血清。
2. 封闭液或抗体稀释液应新鲜配制或冻存。
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原创作者：上海劲马实验设备有限公司
